SDS裂解液
目录编号:T16008
产品规格:100ml
产品简介:
多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,例如Triton、SDS、NP-40等。SDS裂解液 (SDS Lysis Buffer)是一种极其强烈的细胞组织快速裂解液并获得总蛋白质。其裂解液强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(弱)、RIPA 裂解液(中)、通用细胞裂解液、Western及IP细胞裂解液,所获得的蛋白质可以用于Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等。
尚宝生物 SDS Lysis Buffer主要由Tris-HCl、NaCl、SDS等组成,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
产品组成:
产品组成 | 规格 | 保存温度 |
SDS Lysis Buffer | 100ml | -20℃ |
注:自备PMSF溶液(100mM )(可参考尚宝P2010)。
操作步骤:(仅供参考)
(一)贴壁培养细胞
1. 取SDS Lysis Buffe室温溶解混匀,使用前取适量裂解液加入PMSF,使终浓度为1mM。
2. 去除贴壁细胞的培养液,用PBS、NS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。
3. 按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例加入SDS Lysis Buffer。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液作用于细胞1~3s 内,细胞就会被裂解。如果是所提蛋白样品用于CHIP, 应置于冰上或4℃裂解15~30min。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200~250μl。
4. 10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5. 进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。
(二)悬浮培养细胞
1. 取SDS Lysis Buffer置于室温溶解混匀后,使用前取适量裂解液加入PMSF,使其最终浓度为1mM。
2. 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。
3. 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入SDS Lysis Buffer。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200~250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞,充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。通常裂解液作用于细胞1~3s内,细胞就会被裂解。如果是所提蛋白样品用于 CHIP, 置于冰上或 4℃裂解 15~30min。
4. 10000~12000g,4℃离心 5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
5. 进行后续的 Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。
(三)组织样本
1. 取SDS Lysis Buffer置于室温溶解混匀,使用前取适量裂解液加入PMSF,使其最终浓度为1mM。
2. 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。
3. 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在1~2min之内,以减少蛋白的降解。
4. 按20mg组织加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15~30min。如果是所提蛋白样品用于CHIP,置于冰上或4℃继续裂解10~20min。
5. 步骤3、4亦可以采用如下过程:按照每20mg组织加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的SDS Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,过程尽量控制1~2min之内,以减少蛋白的降解。如果是所提蛋白样品用于CHIP, 应置于冰上或4℃继续裂解10~20min。
6. 10000~12000g,4℃离心5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
7. 进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。
注意事项 :
1. 去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。
2. 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。
3. 在培养细胞的裂解中,如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/离心管,然后再裂解。少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
4. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
5. 溶解SDS Lysis Buffer时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。
6. 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。
有效期:12个月有效。
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