共焦激光显微镜是使用“激光共焦光学系统”的显微镜。
通过激光共焦光学获得的高对比度图像
通过组合二维扫描获得的光学切片图像创建全焦点图像
根据光轴方向最大亮度检测到的高度信息
上述组合可以让您获得稳定、高分辨率、高对比度的 3D 图像。
激光共焦光学器件
由于其照射的激光波长短、直线度高,因此与均匀照射光的光学显微镜相比,产生的反射光的散射光较少。
它的特点是在反射光形成图像的位置放置“针孔”并限制激光路径,从而消除散射光。针孔消除了导致焦点失焦的光线(主要是来自物镜焦点位置之外的光线),从而获得高对比度的清晰观察图像。
在设计共焦激光显微镜以获得足够的光量时,调整针孔直径和探测器灵敏度是重要的一点。
二维扫描
共焦激光显微镜在X和Y方向上进行二维扫描,以获得待观察物体的平面图像。
二维扫描有两种方法。
样品扫描方式 |
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激光扫描方式 |
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通过在进行二维扫描的同时沿高度方向移动观察目标和物镜,可以获得各层具有最高亮度和焦点的图像。当组合这些断层图像时,获得在所有表面上都聚焦的图像(全聚焦图像)。
身高信息
在光学显微镜的受光位置设置传感器,识别高度方向的信息。
它感测成像位置处的光量变化,并将该点亮度达到最大时的 Z 轴方向位置记录为“高度”。
这些高度数据和光学图像组合起来构建三维图像的表面形状。
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