CCK-8 细胞增殖和细胞毒性实验

实验步骤：

1.种板数：根据你摸索的，或者查阅文献确定你需要的种板浓度，根据种板浓度对细胞悬液进行稀释，通常细胞增殖实验每孔加入约1000-2000个细胞100ul，细胞毒性实验每孔加入约5000～10000个细胞100ul（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。

2.种板：以96孔板为例，96孔板横向是1-12的数字，纵向是A-H，可做多个实验组，每组设置4-6个复孔，同时设置空白组，最边缘孔加入PBS缓冲液减少蒸发带来的影响，然后将细胞置于37℃ 5%CO2细胞培养箱中培养12-24 h。

3.加药及加药后孵育时间：观察细胞细胞贴壁良好，吸出各孔培养基，实验组加入含不同浓度药物的培养基，空白组加入不含药物培养基，然后将96孔板在37℃ 5% CO2空气的细胞培养箱中孵育适当时间，根据不同实验细胞需求选择适当的孵育条件和时间。

4.加入CCK-8：两种方法，每孔直接加入10ul的CCK-8溶液,或者配置成含10%CCK-8溶液的培养基以换液的形式加入,注意加入过程中避免产生气泡，可以将枪头浸入培养液中缓慢加入。

5.加入CCK-8后孵育时间：将加完CCK-8的培养板放入37°C 5%CO2 培养箱中孵育1-4h，CCK-8试剂加入后孵育时间也需要自己摸索，随着时间的增加，OD值就会增大。可以在0.5h、1.0h、2.0h分别测OD值，把OD值控制在1.0左右。

6.测OD值：将96孔板取出，酶标仪检测各孔在450nm波长处的OD值，分析处理数据，绘制增殖曲线。

7.结果分析：

A．细胞存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值（空白组）各重复孔的OD值取平均数±SD。

细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100%。

B. 求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)。