本期细胞学堂为大家整理了A-498细胞的培养条件与传代、冻存步骤及常见应用，帮助您快速上手开展实验。

A498细胞贴壁生长，呈上皮样形态，细胞铺开面积大，单位面积细胞总数量少，少量细胞有触角；

低密度时可观察到单个细胞清晰的边缘，密度大于100%时边缘不清晰，细胞与细胞之间没有间隙；

细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养；

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；

加1mL胰酶（含0.25% EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化2-3min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆、分离并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化；

按3-4mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4min，弃去上清液，补加2-3mL培养液后吹匀；

收到细胞后首-次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的已添加好新鲜培养基的皿中或者瓶中，传代后每个T25培养液总体积是5-6mL，后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。

有血清程序冻存（需梯度降温）：

配置冻存液，冻存液推荐配比：55%（基础培养基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；

制备好的细胞悬液计数，计算总细胞量；

细胞离心后尽量吸干净上清，离心转速1200rpm（250g）3min；

加入配置好的冻存液重悬，调整细胞浓度为3×10⁶~1×10⁷cells/mL；

分装入冻存管，一个冻存管分装1~1.5mL；

推荐使用程序降温盒，分装好的冻存管转入程序降温盒后直接放入-80℃冰箱过夜；

从-80℃冰箱取出冻存管迅速转移到液氮长期保存。