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微血管内皮细胞（microvascular endothelial cells,MVECs）构成了血液与组织液之间的物理屏障，而且在机体的凝血与抗凝血、致炎与抗炎及免疫应答等方面起着十分重要的作用，其体外培养模型广泛应用于相关研究。但由于不同组织器官的微血管内皮细胞之间存在较大的异质性，同时微血管内皮细胞因解剖部位不同，在形态学、表型和功能上等方面也存在明显异质性，不同来源的血管内皮细胞之间是不可相互替代的，主要包括肠、肺、心脏、脑、脉络膜、视网膜、真皮微血管内皮细胞等。
本期细胞学堂为大家整理了微血管内皮细胞的提取、培养和鉴定方法及步骤，帮助您快速上手开展实验。
提取方法
微血管内皮细胞的提取和培养有酶消化培养法、组织块培养法、免疫磁珠法。
酶消化培养法
采用消化酶将对应组织内细胞间质如基质、胶原蛋白、纤维蛋白等解离，使细胞分散，形成单细胞悬液后再接种进行培养的方法。
主要包括：实验动物及日龄的选择(根据取材部位决定动物日龄）→对应部位的取材→组织的剪碎及清洗→加酶消化→离心去酶→计数后接种培养→细胞纯化→细胞鉴定；
组织块培养法
是将从体内取出的组织剪切成一定大小的组织块后，接种于培养瓶进行的培养。
主要包括：试验动物及日龄的选择(根据取材部位决定动物日龄）→对应部位的取材→组织的剪切→接种培养。
免疫磁珠法
通过在磁珠表面包被具免疫反应性的抗体进行抗原抗体反应，筛选或去除所标记的细胞，达到阳性或阴性选择细胞的目的。
主要包括：实验动物及日龄的选择(根据取材部位决定动物日龄）→对应部位的取材→组织的剪碎及清洗→加酶消化→离心去酶→加入磁珠与细胞孵育→磁珠磁力架分选→收集沉淀技计数→接种培养。
大鼠肺微血管内皮细胞提取示意图[1]
各种提取方法的优劣势
酶消化
培养法
可以在短时间内得到大量细胞，但是操作繁琐，易污染，纯化步骤多，需要使用昂贵的胶原酶，导致成本偏高，并且酶浓度和消化时间需要摸索；
组织块
培养法
成功率较高，成本低，适合于组织量少的原代培养，但是细胞迁出时间不好把握且组织块去除不彻-底会造成其它杂细胞污染；
免疫
磁珠法
得到的细胞纯度高，但是成本高，需要较多的细胞以备筛选和纯化。
鉴定指标
显微镜观察鉴定
可以初步观察细胞形态和生长规律，细胞呈鹅卵石典型的铺路石样、多角形、梭形，细胞核大而清晰；
贴块法获取的肺微血管内皮，呈铺路石样
贴块法获取微血管内皮细胞后进行消化转瓶，消化转瓶或者传代后细胞形态有变化
![大鼠脑微血管内皮细胞提取过程[2]](https://img50.chem17.com/9/20231023/638336514903250516626.png "大鼠脑微血管内皮细胞提取过程[2]")
大鼠脑微血管内皮细胞提取过程[2]
特异性标志
目前使用较多的是FactorⅧ、 vWF、和CD31的阳性表达。
●参考文献●
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