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肺中的支气管经多次反复分枝成无数细支气管，它们的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即为肺泡。肺泡或肺的气体交换表面由 I 型肺泡上皮(ATⅠ,AT1)、II型肺泡上皮(ATⅡ,AT2)和微血管内皮细胞组成。
其中，ATⅠ细胞又称小肺泡细胞，其主要作用是参与构成气血屏障、进行气体交换；ATⅡ细胞又称大肺泡细胞，是肺泡上皮中的祖细胞，具有很强的增殖和分化潜能，可分化成ATⅠ，在维持肺脏稳态以及肺损伤修复过程中起着至关重要的作用。
图1 肺泡模式图
图2 肺泡细胞的外观：上皮I型细胞(I)、上皮II型细胞(II)和毛细血管内皮细胞(E)(bar=4μm)
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什么是Ⅰ型肺泡上皮细胞？
传统的观点认为ATⅡ是肺泡上皮中具有生物学活性的细胞，而终末分化的ATⅠ只是被动地参与气血屏障的形成，不增殖，也不具有可塑性。但最近的研究发现ATⅠ可能不只是传统意义上的终末分化细胞，而具有多样的生物学功能，并在损伤修复过程中发挥一定作用[3]。虽然ATⅠ数量只占全肺总细胞数的8%，但却覆盖了95%~98%的肺泡表面积，是其中最大的细胞之一，平均体积为1,764 μm3。ATⅠ参与气血屏障的形成，对于正常的换气功能非常重要。由于ATⅠ易破裂，缺少生物学标记，分离相对困难，因此目前针对ATⅠ的研究主要采用由ATⅡ分化而来的ATⅠ样细胞，但其生物学特性与ATⅠ细胞存在一定差异。
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什么是Ⅱ型肺泡上皮细胞？
Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡ alveolar epithelial cells，ATⅡ)是由内胚层衍生的多功能极化上皮细胞，存在于成年哺乳动物的肺部远端，与Ⅰ型肺泡上皮细胞偶联镶嵌排列，形成肺泡囊，参与呼吸膜的形成。ATⅡ虽仅占肺泡表面积的7%，但却占实质肺泡细胞总数的16%，平均体积为I型肺细胞的一半，可通过分泌大量的表面活性物质，从而减低肺泡表面张力。另外，其还可参与肺部的炎症反应、免疫反应、细胞外基质(extracellular matrix，ECM)调节和损伤修复等多种生物学活动。
Ⅱ型肺泡上皮细胞的鉴定：
肺表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)基因是目前被发现的唯-一仅在肺泡Ⅱ型上皮细胞中表达的肺表面活性蛋白基因，也是鉴定ATⅡ细胞最-常用的标记物。此外，至少对于小鼠，有报道称，一部分SP-C(+)ATⅡ细胞也被发现表达低水平的Clara/Club细胞基因Scgb1a1/CC10，这些双阳性细胞能够分化成ATⅠ细胞。因此，CC10的共存表达并不绝对排除作为ATⅡ细胞的识别[2]。
图3 Ⅱ型肺泡上皮细胞的鉴定
图3[A]:从分化的人类胎儿外植体中制备的人类ATⅡ细胞在培养4天后使用尼罗红进行脂质染色以识别层状体(LB);"N"=原子核。
图3[B]:来自正常成人肺的人ATⅡ细胞的透射电子显微照片，显示含有致密核心颗粒的形成良好的 LB (LB→)。此外，还鉴定出了多泡体（MVB）和微绒毛（mv）。
图3[C]:对[A]中制备的人ATⅡ细胞单层进行免疫组化，使用抗NPROSP-C(红色)和DAPI(细胞核)对proSP-C进行染色，显示点状胞质染色，表明proSP-C后高尔基体运输到LB。
图3[D]:使用新鲜分离的小鼠ATⅡ的proSP-C抗血清进行蛋白质印迹，显示21 kD proSP-C初级翻译产物(箭头)和低分子量加工中间体(括号)。
图3[E]:使用SP-B抗血清对按照A和C中制备的两种单独的人ATⅡ细胞制剂进行蛋白质印迹。proSP-B初级翻译产物(粗箭头)、25kD 中间体(细箭头)和成熟SP-B(括号)被识别。此外，二聚体成熟的SP-B(箭头)也出现了。[2]
原代肺泡上皮细胞的分离培养：
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取完-全无血液残留的肺脏组织
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消化肺组织
常用消化酶: 胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶;
经支气管将酶灌注到完整的肺中消化，或把肺组织剪碎放入消化液中消化（前者比后者更有效）。
3
分离纯化细胞
原代肺泡上皮细胞分离纯化主要方法：
01
密度梯度离心法
不同细胞的沉降系数不同，在密度梯度离心中细胞所处的位置也相应不同。用ficoll或percoll不连续梯度离心法分离肺泡Ⅱ型上皮细胞。
02
流式细胞技术法
根据不同细胞之间的荧光差异，用荧光物质标记筛选。肺泡上皮细胞内含有丰富的脂类物质，用亲脂性荧光素标记，可以得到纯度很高的细胞。该方法分离细胞的产量很低，但纯度极-高。
03
免疫黏附法
不同细胞的沉降系数不同，在密度梯度离心中细胞所处的位置也相应不同。用ficoll或percoll不连续梯度离心法分离肺泡Ⅱ型上皮细胞。
04
贴壁选择法
肺泡上皮细胞完成贴壁的时间不同，利用这种特性在肺泡上皮细胞培养时做筛选。
●参考文献●
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