肿瘤组织的原代细胞培养有哪些注意事项？

原代培养是直接从生物体组织或器官的一部分进行培养，也称初代培养。肿瘤组织的原代细胞培养技术为肿瘤研究及治疗提供充足的细胞来源是癌症在体外研究的重要工具，与体内研究相辅相成。但目前肿瘤细胞原代培养成功率不高的许多问题还需继续探讨与研究。肿瘤组织的原代细胞培养有哪些注意事项？让我们一起来看看吧！

注意点一：取材部位的选择非常重要，应在癌细胞集中、细胞活力较好的部位取材，尽量避免在坏死区取材；

注意点二：取材后应尽快培养，最好不要超过24h，如需耽搁时间，可将组织块于培养液中浸泡，放置于冰浴或4℃冰箱；

注意点三：癌组织周围的血液、脂肪等正常的组织应去除，可以保证癌细胞的纯度；

注意点四：取材方法：获取的组织块最好能有指尖大小，太小了可能养不起来，因为细胞有生物学环境，细胞多了长得也会快，如果细胞密度太低了，细胞很难长起来，可能的原因是细胞分泌的生长因子。

注意点五：切碎癌组织时，可用眼科剪，也可用小刀，避免用大剪刀，所用刀剪要锋利，以免挫伤细胞。

注意点六：分散细胞的方法：机械和药物两种方法。癌组织不同与正常组织，单纯用机械的剪碎办法，癌细胞就可以游离出来，成为细胞悬液。常用胰蛋白酶、EDTA消化分离。如果从含有大量坚硬的结缔组织分离癌细胞，胶原纤维不能被胰蛋白酶和EDTA消化，则使用胶原蛋白酶消化，如：原代黑色素瘤细胞，黑色素瘤一般长在肢端，肢端的角质层太厚，就需要胶原蛋白酶消化。

注意点七：接种数量要足够，造成培养细胞所必须的生物学环境；

注意点八：更换培养液的时可换半量或1/4量，将pH维持在7.2-7.4；

注意点九：新配试剂要做无菌实验，严格无菌操作，防止污染，新手建议不要直接养原代，先拿实验室的肿瘤细胞养养练练手；

注意点十：若组织在消化时间较长时仍未散开，可采用多次提取消化法以减少酶对已消化下来的细胞的损伤；

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