电泳仪常见问题处理方法

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电泳仪常见问题处理方法

来源：上海旦鼎国际贸易有限公司 2023年08月09日 19:55

注意事项
1、电泳中使用的溴化乙锭（EB）为中度毒性、强致癌性物质，务必小心，勿沾染于衣物、
皮肤、眼睛、口鼻等。所有操作均只能在专门电泳区域操作，戴一次性手套，并及时更换。
2、预先加入EB 时可能使 DNA 的运动速度下降15%左右，且不同构型的 DNA 的影响程度不同。所以为取得较真实的电泳结果可以在电泳结束后再用 0.5μg/ml 的 EB 溶液浸泡染色。EB在光照下易降解，若凝胶放置一段时间后才观察，即使原来胶内或样品已加 EB，建议选择EB溶液浸泡染色。
3、加样进胶时不要形成气泡，需在凝胶液未凝固之前及时**，否则，需重新制胶。
4、电泳时溴酚兰在琼脂糖凝胶中的运动速度可以用于参考电泳速度，已实际电泳条带运动速度为准。
常见问题分析

常见问题	原因	对策
DNA条带模糊	DNA降解	实验过程避免核酸酶污染
	电泳缓冲液陈旧	电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。TBE建议使用10次就更换缓冲液
	所用电泳条件不合适	电泳时电压不应超过6V/CM，温度＜30℃，巨大DNA链电泳，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液的缓冲能力，注意经常更换
	DNA上样量过多	减少凝胶中DNA上样量
	DNA含盐过高	电泳前通过乙醇沉淀去除多余盐分
	有蛋白污染	电泳前酚抽提去除蛋白
	DNA变性	电泳前勿加热，用TE缓冲液稀释DNA
出现片状拖带或涂抹带	PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往PCR体系需要优化，PCR程序需要摸索。	其对策有：调整PCR体系和PCR程序，摸索出合适的条件。
不规则DNA带迁移	电泳条件不合适	电泳时电压不应超过6V/CM，温度＜30℃，巨大DNA链电泳，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液的缓冲能力，注意经常更换
不规则DNA带迁移	DNA变性	电泳前勿加热，用TE缓冲液稀释DNA
带弱或无DNA带	DNA上样量不够	增加DNA上样量，聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度高，上样量可适当降低
	DNA降解	实验过程避免核酸酶污染
	DNA跑出凝胶	缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度
	EB染色的DNA，所用光源不合适	应用短波长（254nm）的紫外光源
DNA带缺失	DNA跑出凝胶	缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度
	分子大小相近的DNA带不易分辨	增加电泳时间，核准正确凝胶浓度
	DNA变性	电泳前勿加热，用20mM Nacl 缓冲液稀释DNA
	DNA链巨大，常规凝胶电泳不合适	在脉冲凝胶电泳上分析
电泳时Ladder扭曲	配胶的缓冲液和电泳缓冲液不是同时配置	同时配置，电泳缓冲液高出液面1-2mm即可
电泳时Ladder扭曲	电泳时电压过高	电泳时电压不应超过6V/CM

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