仪器和试剂：日本岛津公司Le-10A液相色谱；SPD-10A紫外-可见分光度检测器；色谱柱C18Shim-pack VP-ODS 150×4.6mm,维生素D₃对照品（含量≧99.9%），甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为二重蒸馏水。对照品储备液为1.000mg/ml的维生素D₃甲醇溶液。方法和结果：柱温为室温，流速为1ml/min,进样量为10ul,检测波长254nm，同一批次样品，多次检测（见表1）。

表1 不同流动相配比时，维生素D₃的含量测定

液相色谱是以液体作为流动相的一种色谱分离技术。它利用流动相液体将被分离混合物带入色谱柱中，根据各组分在固定相及流动相中吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子大小的差异进行分离。液相色谱并不受样品的挥发度和稳定性的限制,且非常适合于分离生物药品的大分子、离子型化合物、不稳定的天然产物以及其他各种高分子量的或不稳定的化合物。对于很难分离的样品,用液相色谱常常比用气相色谱容易完成,被广泛应用于石油和化工等领域。目前研究和使用较多的液相色谱主要有高效液相色谱法(HPLC)。