分离胶浓度6%/8%/10%/12%/15%，搭配上层胶溶液B中的红色或绿色染料，多种搭配任你选择，蛋白点样孔清晰可见，提高点样效率。

清洗玻璃板

用洗涤剂清洗垂直电泳仪（SVE-2）玻璃板，清水冲洗两次，再用纯水（G4701-500ML）漂洗一次，自然晾干或者使用风扇吹干；

配置分离胶和浓缩胶

根据目的蛋白分子量和所选电泳缓冲液不同，选择合适浓度的SDS-PAGE下层胶，参照表格：

配制10% AP溶液：称取AP（过硫酸铵）粉末0.1 g，用1 mL纯水溶解。该溶液4℃存贮1-2周有效，-20℃保存3个月有效；

根据实验需求，等比例混合对应的溶液A和B，加入适量的10% AP溶液，分别配制下层胶溶液、上层胶溶液。不同规格以及不同厚度的玻璃板可以等比例调整上层胶和下层胶溶液的配制体积，以常用规格约8.3 cm×7.3 cm 凝胶板和10% SDS-PAGE彩色(红色)凝胶超快速配制试剂盒为例，推荐配制体系如下表格：

配胶试剂里面的 AP 需要根据实验室实际温度来适量的增加或者减少，比如夏天温度较高自然凝胶速度较快，AP 的量需要适当的减少；冬天温度低，凝胶慢，需要适量的增加。

制胶 

向两块玻璃板中间胶室中缓慢注入配制好的下层胶溶液至胶室的三分之二到四分之三处（根据实际实验需求来定），然后使用双蒸馏水左右移动均匀加至胶室内，使其起到密封作用（加样时请务必小心，避免产生气泡）。静置15-30 min左右等待凝胶聚合，倒出双蒸馏水，并用吸水纸清理胶室残留液体。

使用配制的上层胶溶液加样灌满胶室（高度至凹板玻璃缺口上沿），随后插入加样梳子。等待约15-30 min凝胶聚合后，制胶过程完成。

上样电泳 

等浓缩胶凝固好，拔掉梳子，如果点样孔弯曲，可用上样针拨正，之后可上样，Marker孔加入5-10μL蛋白Marker，其余蛋白总上样量30-50μg。将制胶器放进电泳槽，倒入电泳缓冲液，连接电泳电源（PW-600），将电压调至 60-90V ；样品进入分离胶之后，将电压调至 120-150V，等到溴酚蓝指示剂距离胶最底部大约 1cm，即可终止电泳 （想要更快完成电泳实验，或对小分子蛋白分离要求更高，建议选用G2081 SWE快速高分辨电泳缓冲液，可全程200-250 V恒压，约30 min可完成电泳，大大节约时间，并且对小分子蛋白分离效果更好）。

电泳相关常见问题和处理方法

电泳步骤操作不当可能会导致条带结果有问题，分享一些电泳相关常见问题和对应的处理方法，希望能给大家启发和帮助~

“微笑”现象

条带出现微笑现象(中间凹两边翘起)：主要由于凝胶中间部分凝固不均。

处理方法：应待凝胶充分凝固后电泳，或者加入催化剂后充分混匀。

拖尾现象

条带出现拖尾现象：主要是样本溶解效果不佳，或分离胶浓度过大，或电泳缓冲液放置时间过长。

处理方法：加样前离心；加适量的样品促溶剂；降低凝胶浓度或使用梯度凝胶；重新配置电泳缓冲液。

条带过粗：可能是上样量过大；浓缩胶未浓缩好；浓缩胶pH值不正确；电压过高。

处理方法：减少上样量；增加浓缩胶长度；保证浓缩胶的pH正确（6.8）；降低电压。

纹理现象

条带不整齐

条带不整齐：

可能是由于胶凝固不均匀，建议待胶凝固后上样；

可能是由于电泳的时候，有气泡在胶的下边缘，建议电泳前，检查并赶走胶底部的气泡；

可能是由于上样buffer不是工作液浓度，建议重新配置上样buffer；

可能是由于拔梳子导致样品孔不齐，建议水平缓慢的拔梳子。