中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 4139-2015

出口水果蔬菜中乙萘酚残留量的测定

Determination of 2-naphthol residue in fruits and vegetables for export

1范围

本标准规定了植物源性食品中乙萘酚含量的高效液相色谱（HPLC）检测以及高效液相色谱-质谱/质谱（LC-MS/MS）检测和确证方法。

本标准适用于苹果、柑橘、小白菜、西红柿等食品中乙萘酚含量的测定和确证。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可（ke）少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

试样经乙腈提取，氨基柱净化，经高效液相色谱仪和高效液相色谱-质谱/质谱仪检测，外标法定量。

4试剂和材料

除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。

4.1乙腈：高效液相色谱级。

4.2甲醇：高效液相色谱级。

4.3 甲苯。

4.4氯化钠。

4.5乙腈-甲苯溶液（3+1，体积比）：量取300 mL乙腈（4.1）和100 mL甲苯（4.3），混匀后备用。

4.6乙腈溶液（5+5，体积比）：准确量取 50 mL乙腈（4.1）和50 mL水，混匀后备用。

4.7 乙腈溶液（1 +9，体积比）：准确量取10 mL乙腈（4.1）和90 mL水，混匀后备用。

4.8乙萘酚标准品：CAS NO.：135-19-3，纯度≥99.5%。

4.9标准储备溶液：精确称取适量的上述标准品，用甲醇溶解配制溶液浓度1mg/mL的标准储备溶液，-20℃下保存。

4.10标准中间溶液：用甲醇分别稀释标准储备液至终浓度约为10 mg/L，低于4℃下保存。

4.11基质标准工作液：吸取适量的标准中间溶液（4.10），用空白样品提取液配成适当浓度的混合标准工作溶液。现配现用。

4.12 氨基柱：3 mL，500 mg或相当者。使用前用5 mL甲苯、5 mL乙腈和5 mL乙腈-甲苯溶液（4.5）活化。

4.13 0.22μm微孔滤膜，有机系。

5仪器和设备

5.1高效液相色谱仪，配有荧光检测器。

5.2高效液 相色谱质谱/质谱仪，配电喷雾离子源（ESI）。

5.3 电子天平：感量为0.01 g和0.01 mg。

5.4旋转蒸发仪。

5.5旋涡混匀器。

5.6氮吹仪。

5.7 离心机：5 000 r/min。

5.8具塞塑料离心管：50mL。

6试样制备与保存

6.1试样制备

蔬菜、水果样品取可食部分切碎，用均质器匀浆后装入洁净容器内密封，并标明标记。

6.2试样的保存

将试样于-18℃以下保存。

7测定步骤

7.1 提取

称取匀浆后的样品10.0g于50 ml离心管中，加入25 mL乙腈（4.1），再加入3 g氯化钠（4.4），涡旋振荡提取5min，5000r/min离心3min将上层有机相转移至旋蒸瓶中。用25mL（4.1）乙腈重复提取1次，合并有机相，在40℃水浴锅中旋转浓缩至约1 mL，向旋蒸瓶中加入5mL乙腈-甲苯（3+ 1）（4.5）溶液溶解残渣，待净化。

7.2净化

将上述溶液全部转移至活化后的氨基柱上，用鸡心瓶收集流出液，再每次用2 mL乙腈-甲苯 （3+1）（4.5）溶液洗涤旋蒸瓶3次，并将洗涤液移入柱上，再用10 mL乙腈甲苯（3+ 1）（4.5）溶液洗脱化合物，收集全部流出液。并在40℃水浴锅中旋转浓缩至约1 mL，氮吹至干。HPLC法用1 mL乙腈溶液（4.6）或LC-MS/MS法用1 mL乙腈溶液（4.7）溶解残渣，过滤膜后供HPLC或LC-MS/MS测定。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱条件

液相色谱条件如下：

a） 色谱柱：C18柱，250 mm×4.6 mm（内径），5.0μm，或功能相当者；

b） 流动相：乙腈和水（50+50，体积比），等体积洗脱；

c） 流速：1 mL/min；

d） 波长：激发波长λex=250 nm，发射波长λem=410 nm；

e） 柱温：30℃；

f） 进样量：20μL。

7.3.2 液相色谱-质谱/质谱条件

液相色谱-质谱/质谱条件如下：

a）色谱柱：C18，150 mm×2.0（i.d.）mm，5.0μm，或功能相当者；

b）流动相：乙腈（B）：2 mmol/L乙酸铵溶液（A），梯度洗脱程序见表1；

c）流速：0.30 mL/min或根据仪器条件优化；

d）柱温：40℃；

e）进样量：30μL；

f）离子源：电喷雾离子源；

g）离子化模式：负离子；

h）扫描方式：多反应监测（MRM）；.

i）其他质谱条件：见附录 A。

7.3.3 定量测定

高效液相色谱法采用保留时间定性、峰面积定量，如果残留量超出标准曲线范围，应用定容溶液进行适当稀释。标准品的色谱图见附录B中的图B.1，乙萘酚的保留时间为8.0 min。

液相色谱-质谱/质谱条件测定样液和基质标准工作容液，基质标准曲线法测定样液中的乙萘酚药物残留量。样品中待测物残留量应在标准曲线范围之内，如果残留量超出标准曲线范围，应用空白样品提取液进行适当稀释。标准品的多反应监测色谱图见附录B中的图B.2，乙萘酚的保留时间为9.1min。

7.3.4 定性测定

按照上述条件测定样液和标准溶液，如果样液中待测物的色谱峰保留时间与标准溶液一致，并且在扣除背景后的样液谱图中，所选择的离子对均出现，各定性离子的相对丰度与标准品离子的相对丰度相比，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。

7.3.5空白实验

除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

8结果计算

用色谱数据处理机或按照式（1）计算样品中待测物的残留量，计算结果需扣除空白。

式中：

x——试样中被测组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

c——从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

V——试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；

m——试样溶液所代表的质量， 单位为克（g）。

9测定低限、回收率

9.1 测定低限

高效液相色谱的测定低限为50μg/kg，高效液相色谱质谱/质谱的测定低限为10μg/kg。

9.2回收率

不同基质中添加深度水平下的回收率范围见表3和表4。