中华人民共和国农业行业标准

NY/T 1722-2009

蔬菜中敌菌灵残留量的测定

高效液相色谱法

Determination of anilazine residue in vegetables by HPLC

前言

本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。

本标准由全国蔬菜标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：农业部蔬菜品质监督检验测试中心（北京）。

本标准主要起草人：赵文、靳松、刘肃、林桓。

1范围

本标准规定了新鲜蔬菜中敌菌灵残留量的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于番茄、菜豆、黄瓜、甘蓝、白菜、芹菜、胡萝卜等蔬菜中敌菌灵残留量的测定。本标准方法的检出限为0. 01 mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/ T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

在弱酸性条件下用乙腈提取试样中敌菌灵，加氯化钠盐析分层，经弗罗里硅土固相萃取柱净化后，用高效液相色谱仪进行分离。敌菌灵苯环上的π电子在波长250nm处被激发，其吸收强度由紫外检测器检测。分别记录标样和试样的峰高，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

4试剂和材料

除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和GB/ T 6682中规定的至少二级水。

4.1氯化钠（NaCI）。

4.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。

4.3正己烷（C6H14）：色谱纯。

4.4丙酮（C3H6O）：色谱纯。

4.5乙腈（CH3CN）：色谱纯。

4.6磷酸（H3PO4）。

4.7丙酮+正己烷混合溶液（1+19）。

4.8丙酮+正己烷混合溶液（15+85）。

4.9磷酸溶液[ ω（H3PO4）= 1%]：称取10g磷酸（4.6） ，加水至1 000 mL，摇匀。

4.10敌菌灵标准品：纯度≥98%。

4.11敌菌灵标准贮备液：准确称取0.1mg敌菌灵标准品，用甲醇（4.2）溶解并转移至100mL容量瓶中，再用甲醇（4.2）定容至刻度，得到质量浓度约为1 000 mg/ L的敌菌灵标准贮备液。贮于-20℃~-16℃ 冰柜中备用。有效期为2个月。

4.12敌菌灵标准工作溶液：使用时将敌菌灵标准贮备液（4.11）用甲醇（4.2）稀释得到质量浓度为0.5mg/L的敌菌灵标准工作溶液。有效期为1周。

4.13 0.45μm有机微孔滤膜。

4.14固相萃取柱，填料为弗罗里硅土，容积6mL，填充物1g。

5仪器

5.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器。

5.2分析天平，感量0.1mg和0.01g。

5.3食品加工机。

5.4均质器，6 000 r/min~36 000 r/min。

5.5旋转蒸发仪。

5.6氮吹仪。

6试样制备

将蔬菜样品取可食部分，用干净纱布轻轻擦去样品表面的附着物，采用对角线分割法，取对角部分，将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入食品加工机中捣碎成匀浆。匀浆放入容器（除聚氯乙烯材质外）中，于-20℃~-16℃条件下保存。称取试样前，常温试样应搅拌均匀，冷冻试样应先解冻再混匀。

7分析步骤

7.1 提取

称取试样20g（精确至0.01g）于150mL烧杯中，向烧杯中加入1.00mL磷酸溶液（4.9），然后加入50.0 mL乙腈（4.5），高速均质约1 min。滤液经滤纸过滤至装有7 g~10 g氯化钠（4.1）的具塞玻璃试管中，盖上塞子，剧烈振荡约1 min，在室温下静止2 h以上或使用离心机离心，使得乙腈相和水相充分分层（若有乳化现象，加少量蒸馏水振摇后继续分层）。

用移液管准确吸取10.00mL乙腈提取液至50mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪上（水浴温度40℃）浓缩至近干，加入3. 0 mL正己烷（4.3）待净化。

7.2净化

依次用3 mL丙酮-正己烷混合溶液（4.7）和4 mL正己烷（4.3）预淋弗罗里硅土柱，弃去流出液。当正己烷液面到达柱吸附层表面时，立即倒入7.1中得到的溶液，用15mL丙酮-正己烷混合溶液（4.8）分三次冲洗烧杯后淋洗弗罗里硅土柱（4.14），用100 mL烧杯接收洗脱液。将盛有洗脱液的烧杯置于氮吹仪上，在水浴温度40℃条件下，氮吹蒸发至完（wan）全干燥，用4.00 mL甲醇（4.1）溶解蒸残物，用微孔滤膜（4.13）过滤至2mL样品瓶中，待测。

7.3色谱参考条件

7.3.1色谱柱：C18不锈钢柱，柱长250 mm，内径4. 6 mm，粒径5μm，或相当者。

7. 3.2 流动相：A：水，B：乙腈，按表1进行梯度洗脱。

7.3.3柱温：30℃。

7.3. 4流 速：1.0 mL/ min。

7.3.5检测波长：250 nm。

7.3.6进样量：10μL。

7.4 测定

分别吸取10μL标准溶液和待测液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，以待测液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。

7.5空白实验

除不称取试样外，采用与试样完（wan）全相同的测定步骤进行平行操作。

8结果计算

试料中敌菌灵含量用质量分数ω计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按下列公式计算：

式中：

ρ_S——标准溶液质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）；

V_S——标准溶液进样体积，单位为微升（μL）；

V₀——试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；

V_X——待测液进样体积， 单位为微升（μL）；

A_S——标准溶液的峰面积；

A_X——待测液的峰面积；

m——试料质量， 单位为克（g）；

F——提取液体积/分取体积；

计算结果保留两位有效数字。

9精密度

在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的15%。在再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的30%。

10色谱图

敌菌灵标准溶液色谱图见图1。