ELISA方法学在实验中运用的很广泛,5个实验3个实验都是用ELISA法检测的,对于ELISA实验中也是有多种方法学可以选择的,今天我们着重的讲解下ELISA实验中竞争法检测抗-HBe,先来了解一下实验原理吧!
一、实验原理
用抗-HBe包被固相载体后,同时加被检血清和合适滴度中和试剂HBeAg,若被检血清中含有抗-HBe,则与包被抗-HBe竞争结合HBeAg,被检标本中抗-HBe越多,HBeAg被结合越多,而与包被抗-HBe结合就越少,加底物后显色就越浅;反之越深。
二、主要试剂与器材
ELISA试剂盒:内含已包被抗-HBe板条、HRP-抗HBe溶液、中和试剂HBeAg溶液、阳性和阴性对照血清,底物溶液(A液、B液)、终止液、洗涤液。
三、结果分析
1.P/N≤0.3为阳性。P/N>0.3为阴性。
2.P/N=待检血清OD值/阴性对照OD值。
四、注意事项
1.试剂置2-4℃保存。取用时应先置室温平衡。干包被板条须密封防潮,冻存,取用后余者及时封存。
2.恰当选好HBeAg的浓度。
3.试剂用前应摇匀。
五、操作步骤
1.加样:取出干包板条,按编号顺序分别加50μl待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清于相应孔中。设空白对照孔,除此孔外,每孔加HBeAg50μl、HRP-抗HBe50μl,振荡混匀后,置43℃(或37℃)温育1h。
2.洗涤:甩去孔内液体,用洗涤液注满各孔,静置20s,甩干。如此重复洗涤4次,在吸水纸上拍干。
3.显色:每孔加显色剂A、显色剂B各50μl,振荡混匀后置37℃避光显色10-15min。
4.终止:每孔加终止液50μl,振荡混匀。
5.酶标仪检测:选用450nm波长,用空白孔调零之后测各孔OD值。
更多实验资讯可咨询我司业务员。上海恒远生物科技有限公司拥有自己的实验室,备有专业的技术研发团队,长期致力于各种生物试剂,细胞,血清,ELISA试剂盒的研发与销售,实验提供免费代测服务,并提供专业的技术服务,如果您有实验上的问题欢迎前来咨询,为您提供专业的一对一技术指导。
相关产品
免责声明
- 凡本网注明“来源:化工仪器网”的所有作品,均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:化工仪器网”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源(非化工仪器网)的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品第一来源,并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。