布鲁氏菌病抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
使用说明书
【产品名称】
通用名:布鲁氏菌病抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Brucella(ELISA)
【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【预期用途】 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌(Brucella)引起的人、畜共患传染病,其特征是生殖器官和胎膜炎,引起流产、不育和各种组织的局部病灶。
本试剂用于检测牛、羊血清中布鲁氏杆菌抗体,可用于布鲁氏菌疫苗免疫效果评价或该病的辅助诊断。
【原 理】
本试剂盒由预包被布鲁氏菌抗原的酶标板、酶标记物、抗体工作液及其他配套试剂组成,应用竞争酶联免疫法(ELISA)原理检测牛羊血清、血浆样本中布鲁氏菌抗体。实验时在酶标板中加入待检样本及酶标记物、抗体工作液,经温育后若样品中含有布鲁氏菌抗体,则将与抗体工作液竞争结合酶标板上抗原,酶标记物与抗体工作液及酶标板上抗原形成复合结合物;再经洗涤除去未结合的其他成分,在孔中加TMB底物液,若样品中含有布鲁氏菌抗体则将阻断酶标记物、抗体工作液与酶标板上抗原结合,从而使后续反应不出现显色;反之则出现显色;显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有布鲁氏菌抗体。
【试剂盒组成】
序号 | 名称 | 规格/96T×1 | 规格/96T×2 | 规格/96T×5 |
1 | 酶标记物 | 6ml×1(红盖) | 11ml×1(红盖) | 26ml×1(红盖) |
2 | 抗体工作液 | 6ml×1(蓝盖) | 11ml×1(蓝盖) | 26ml×1(蓝盖) |
3 | 20X浓缩洗涤液 | 40ml×1(白盖) | 40ml×1(白盖) | 200ml×1(白盖) |
4 | 底物液A | 6ml×1(白盖) | 11ml×1(白盖) | 26ml×1(白盖) |
5 | 底物液B | 6ml×1(黑盖) | 11ml×1(棕盖) | 26ml×1(黑盖) |
6 | 终止液 | 6ml×1(黄盖) | 11ml×1(黄盖) | 26ml×1(黄盖) |
7 | 阳性对照 | 1.0 ml×1(红盖) | 1.5 ml×1(红盖) | 2.0 ml×1(红盖) |
8 | 阴性对照 | 1.0 ml×1(绿盖) | 1.5 ml×1(绿盖) | 2.0 ml×1(绿盖) |
9 | 酶标板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
10 | 盖板膜 | 1 | 2 | 5 |
11 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
12 | 说明书 | 1 | 1 | 1 |
13 | 稀释板 | 1 | 2 | 5 |
【储存及有效期】 2~8℃保存,有效期12个月。
包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮,使用期限为2个月。
【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。
2.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。
3.用工作洗涤液将待检牛血清先按10倍稀释(如10μl血清加入90μl工作洗涤液中,混匀),待检羊血清按25倍稀释(如4μl血清加入96μl工作洗涤液中,混匀),阴、阳性对照不用稀释。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条,设阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl;样品孔每孔先加入稀释后的血清样品50μl。
然后每孔依次加入50μl酶标记物、50ul抗体工作液。
4.混匀,盖好盖板膜,置37℃(推荐水浴)避光反应45分钟。
5.甩去孔内液体,每孔加350μl工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,最后一次拍干。
6.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,盖好盖板膜,置37℃避光反应15分钟。
7.每孔加终止液50μl,混匀,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。
【参考值】实验正常的情况下,阴性对照吸光值≥1.0,阳性对照吸光值≤阴性对照吸光值×50%。
【检验结果的解释】
1. PI(阻断率)=(1- 阴性对照平均A值)×100%,PI≥50%为阳性;PI<50%为阴性。
2. 本实验结果为阳性时表明动物样本含有布鲁氏菌抗体,需结合临床及其他方法进行分析。
【试验方法的局限性】
本检测结果仅供筛查,不作为确诊依据。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
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