中华人民共和国农业行业标准

NY/T 1680-2009

蔬菜水果中多菌灵等4种苯并咪唑类农药残留量的测定

高效液相色谱法

1范围

本标准规定了用反相离子对高效液相色谱法测定蔬菜、水果中多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵和2-氨基苯并咪唑残留量的方法。

本标准适用于蔬菜、水果中多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵和2-氨基苯并咪唑等四种苯并咪唑类农药残留量的测定。

本标准方法检出限：多菌灵为0.07mg/kg，甲基硫菌灵为0.09mg/kg，噻菌灵为0.05mg/kg，2-氨基苯并咪唑为0.10mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

样品中的多菌灵等4种苯并咪唑类农药用乙腈提取，硫酸镁盐析、净化后，经反相离子对色谱分离，多菌灵在275nm、甲基硫菌灵在265nm、噻菌灵在300nm、2-氨基苯并咪唑在275nm处检测，根据保留时间进行定性，外标法定量。

4试剂

除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，水为GB/T 6682规定的二级水。

4.1乙腈：色谱纯。

4.2甲醇：色谱纯。

4.3丙酮：色谱纯。

4.4三乙胺：色谱纯。

4.5 磷酸。

4.6无水硫酸镁：（140±2）℃烘烤4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。

4.7 N -丙基乙二胺（PSA）：40μm，60A。

4.8癸烷磺酸钠：纯度≥98%。

4.9离子对试剂：吸取7.0mL磷酸于200mL水中，加入1.0g癸烷磺酸钠，溶解，再加入10.0mL三乙胺，稀释至1000 mL。

4.10多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵和2 -氨基苯并咪唑标准品：纯度≥98%。

4.11标准储备溶液：分别称取0.0100g（准确至0.0001g）多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵和2-氨基苯并眯唑标准品，用丙酮溶解定容至100mL，配制成100mg/L的标准储备溶液，于-18℃避光保存1年。

4.12混合标准工作溶液：分别准确吸取多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵和2-氨基苯并咪唑标准储备溶液0.25mL，在30℃~40℃下用氮气缓缓吹干。用4.0mL甲醇溶解，再用离子对试剂定容至10.0mL，0℃~4℃避光保存1个月。

5仪器

5.1高效液相色谱仪：带可调波长紫外检测器。

5.2高速匀浆机，转速大于10000 r/ min。

5.3氮吹仪。

5.4 离心机。

6分析步骤

6.1试样的制备

取不少于1000g样品，去除其中杂物，取可食部分，用干净纱布轻轻擦去样品表面的附着物，将样品缩分至250g，粉碎后密封，制成试样备用，剩余试样于-18℃保存。

6.2样品处理

6.2.1提取

称取25g试样（精确到0.01g）于100mL具塞离心管中，加入25.0mL乙腈，高速匀浆2min，加入15g无水硫酸镁，盖上盖子，剧烈振摇1min，静置30min，2500r/min离心5min，使乙腈和水相分层。

6.2.2净化

移取1. 0mL上层乙腈溶液于2 mL离心管中，加入200mg无水硫酸镁和50mg PSA，2500r/min离心5min。准确吸取0.5mL乙腈溶液，然后加入离子对试剂0.5mL，振荡后过0.45μm滤膜，待测。

6.3 测定

6.3.1色谱参考条件

6.3.1 色谱柱：C18柱，250 mm×4.6mm，5μm。

6.3.1.2检测波长：见表 1。

6.3. 1.3柱温：45℃。

6.3.1.4进样量：40μL。

6.3. 1.5流动相：甲醇+离子对试剂（40+60）。

6.3. 1.6流速：1.25mL/min。

6.3.2样品测定

按仪器条件，对标准工作液和试样溶液等体积交替进样，根据保留时间定性，外标法定量。同时做试剂空白。

7结果计算

样品中被测农药含量以质量分数ω计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）计算：

式中：

c——标准溶液中各农药的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；

A1——样品测定液中各农药的峰面积；

A2——标准溶液中各农药的峰面积；

V——样品提取液的体积，单位为毫升（mL）；

V1——标准溶液的进样体积，单位为微升（μL）；

V——样品溶液的进样体积，单位为微升（μL）；

m——试料的质量，单位为克（g）；

f——稀释倍数，f=2。

计算结果表示到二位有效数字。样品含量超1mg/kg时表示到三位有效数字。

8精密度

在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的10%。

9色谱图

四种苯并咪唑类农药标准色谱图见图1。