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多重组合灵活应用 | 看安捷伦 N 糖样品前处理如何助力糖基化检测

来源:安捷伦科技(中国)有限公司   2023年03月28日 14:37  

糖基化是生物治疗蛋白的一种重要的翻译后修饰过程。糖基化生物功能的重要性以及分析检测技术手段的不断提升,使得糖基化分析逐步从表征方法向工艺监控和放行检测方面拓展,2020 版药典增加单抗的 N- 糖检测标志着糖基化检测将在生物制药行业得到越来越深入的研究,并且广泛应用以确保生物治疗蛋白的安全性和有效性。在此背景下,许多实验室希望能够获得一套完整而灵活、流程化和模块化操作的方案。


常见的 N- 糖表征方法包括酶促游离多聚糖的标记,以实现荧光检测(FLD)并增强质谱(MS)的电离。这些标记的多聚糖由液相色谱(LC) ,借助 FLD 进行相对定量分析,利用 MS 检测进行质量测定。亲水相互作用液相色谱(HILIC)是标记 N- 糖常用的分离技术。


安捷伦现提供几种灵活而模块化样前处理选项来支持您的 N 糖检测,囊括了三代糖处理技术手段,包括:



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最新产品 Gly-X。该产品可将样品前处理时间缩短至 1 小时,采用 5 分钟的 PNGase F 酶解以及具有高 FLD 和 MS 信号的糖胺标记染料 InstantPC。另外可用 2-AB 和 APTS 进行标记,工作流程时间约为 2 小时

2

离心型试剂盒 GlykoPrep。该产品基于 2012 年推出的 AssayMAP 小柱,工作流程时间为 3–5 小时

3

用于传统 2-AB 标记方法的产品

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安捷伦针对不同的应用场景,为您提供了几种可用于 N-糖样品前处理的组合选项。



套装一

药典 2-AB 标记方法的产品便捷经济标准版:


传统标记法的产品组合更经济,特别适合于样品通量不高的客户。传统的前处理工作流程包括使用 PNGase F 在天然或变性条件下的酶解、游离多聚糖纯化、荧光标记以及纯化标记的多聚糖。安捷伦有完善的一站式产品供应服务,提供整个流程中需要的高质量的试剂组分。


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套装二

药典 2-AB 标记快速高效升级版:


使用 2-AB(2-氨基苯甲酰胺)生成标记的 N-糖数据已有 20 多年的历史,在许多实验室中均得到了良好的应用。AdvanceBio Gly-X(原 ProZyme)是新一代的 N-糖样品前处理技术。通过酶促反应快速(5 分钟)释放 N-糖,并用还原胺化染料进行标记。传统上,使用 2-AB 标记要求在标记反应前对样品进行干燥处理,而使用 Gly-X 2-AB Express 基质上标记则无需进行该步骤。样品前处理时间:约 2 小时。



套装三

InstantPC 标记快速高灵敏增强版:


Gly-X N-糖样品前处理工作流程可在 5 分钟内释放 N-糖,使用 InstantPC 进行即时糖胺标记,InstantPC 标记的多聚糖在正离子模式下显示出了更高的 FLD 信号和更高的 MS 电离效率,从而能够可靠地检测低丰度的多聚糖种类


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多聚糖标记的 FLD(A)和 MS(B)响应对比。

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套装四

寡糖深度表征糖苷酶以及标准品套装专业版:


寡糖的深度表征需要采用“化整为零”的方式研究糖的结构,安捷提供用于研究的各种内切糖苷酶和外切糖苷酶,能够更清晰地呈现糖的结构。内切糖苷酶可将寡糖从糖蛋白及其他底物中释放出来。这些酶可用于糖蛋白的去糖基化以分析。外切糖苷酶是一种糖苷水解酶,可酶解末端残基的糖苷键。这些酶可用于研究游离的多聚糖、糖脂和糖蛋白,针对特定结合位点的外切糖苷酶也可用于寡糖的测序。


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我们为您提供已标记的多聚糖标准品。支持 InstantPC、2-AB、2-AA 和 APTS 标记物,均可用于 LC/FLD、LC/MS、CE/LIF 和 CE/MS 等流程的定性工作。这些标准品涵盖了包括复杂二天线中性型与唾液酸化型、高甘露糖型以及 α-Gal 型的多种常见多聚糖类型。此外,我们还提供糖蛋白的多糖混标,如:人 IgG,牛 RNA 酶 B,牛胎球蛋白,人 α1-酸糖蛋白(AGP), 中国仓鼠卵巢(CHO)细胞产生的重组单克隆 IgG(mAb), 三天线和四天线唾液酸化 N- 糖混标。


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