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你是怎么分辨各种RNA酶的?

来源:上海远慕生物科技有限公司   2023年03月14日 11:20  

RNA酶
RNA酶,是一种将RNA水解成小分子核苷酸的核糖核酸酶。不同的RNase其专一性不同,因此作用的底物及切割位点也不一样。今天远慕生物就给大家扒一扒各种特色RNA酶的作用及应用场景。

RNase R
RNase R是一种Mg2+依赖性的3’→5’核糖核酸外切酶,基本能消化所有线性RNA,但不消化套索或环状RNA,或者短于7个核苷酸的具有3’突出端的双链RNA。即是除了tRNAs,5S RNA和内含子套索外,大多数细胞RNAs都将被RNase R完quan消化。
应用:circRNA富集、cDNA文库的内含子筛选。

RNase H
RNase H是指核糖核酸酶H,是一种核糖核酸内切酶,可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase H不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键,即不能消化单链或双链DNA或RNA。

应用:
● 在cDNA第二链合成前去除mRNA
● DNA-RNA杂交体的鉴定
● 在Oligo(dT)存在下去除mRNA 的poly(A)尾

RNase A
核糖核酸酶A (RNase A) 是一种核糖核酸内切酶,在嘧啶残基的3’末端切割单链RNA,形成具有3’-末端嘧啶-3’-磷酸酯的寡核糖核苷酸。通过RNase A切割相邻的嘧啶核苷酸,嘧啶-3’-单磷酸也被释放。含有嘧啶-2’-氟-dNMP修饰的RNA,如通过DuraScribe? T7 Transcription Kits(Cat#DS010925)试剂盒体外转录形成的DuraScript? RNA,能够完quan抵抗RNase A的切割。

应用:可以用来去除DNA制品中的污染RNA,如基因组DNA/质粒提取。

RNase I
RNase I通过分裂每个磷酸二酯键,优先将单链RNA降解为单个核苷3’单磷酸。相比之下,其他核糖核酸酶只在特定的残基之后才裂解(例如,RNase A裂解3’到嘧啶残基),而RNase I没有碱基偏好性。另外,RNase I具有热不稳定性,在70°C加热15min后很容易失活。

应用:
● 从DNA制备物中去除RNA;
● 核糖核酸酶保护试验(RPA)中分析和定量RNA;
● 检测RNA:RNA和RNA:DNA杂交体中的单碱基错配。


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