2022年是挑战与机遇并存的一年。这一年，Incucyte® 硕果累累，引用文献总数正式突破10000篇。其中，仅2022年CNS主刊文章就有近30篇之多（参见文末列表）。你是不是也很好奇：这些顶刊文章聚焦了哪些领域？它们又是如何应用Incucyte® 的呢？为此，我们对这28篇文献进行了总结和分析，希望帮助读者更好了解和应用Incucyte®，以期2023，再创佳绩！

Incucyte® 实时活细胞分析系统应用非常广泛，总览这些文章，Incucyte® 的应用涉及细胞杀伤、周期、内吞、肿瘤球、趋化、克隆稀释、报告基因等多个领域。从应用方向来看，细胞杀伤仍是最热的方向，其次是细胞实验中常用的细胞活性检测（增殖和凋亡）。从研究领域来看，细胞治疗作为肿瘤免疫研究的焦点，展现出长效治疗方面的潜力，因此细胞治疗仍然是Incucyte® 占比最高的领域，除此之外，Incucyte® 在基因调控、细胞代谢、细胞外基质等基础研究及肿瘤、衰老等疾病机理研究方面也展现出不俗的实力。

Incucyte® 除了应用广泛的特点，其智能化拍摄分析大大加速研发进度，我们挑选了四篇代表性文章，看看他们具体是如何应用Incucyte® 的。

1 一天四篇Nature，Incucyte® 助力罕见病研究

7月20日Nature同期刊登四篇文章均使用到了Incucyte® , 其中的三篇^[1-3]，同时报道了对AGS综合征罕见病的重大研究进展，发现了一种ADAR1突变型AGS综合征的ZBP1的激活引发全新发病机制，为探索ZBP1后续是如何激活下游信号通路，调控免疫应答，促进疾病表型的具体机制。

研究者使用细胞凋亡通路敲除原代MEF细胞，应用Incucyte® ，统计细胞死亡情况，验证ZBP1依赖性细胞凋亡通路（图1）。Incucyte® 满足密集时间点以及长时间检测的需求，一次实验得到大量数据，解放双手，灵敏度高，死亡比例差距很小仍能得到确切结论。

A

B

C

图1. A：Incucyte® 统计死亡细胞信号强度，软件可直接导出数值；B，C：统计细胞死亡比例，Cytotox Green直接加入培养基中，阳性细胞为凋亡细胞，阳性细胞百分比（绿色荧光面积/总汇合度面积）为纵坐标，时间点为横坐标。

陈老湿解读：为什么一天能有4篇Nature用到Incucyte® ？因为Incucyte® 满足密集时间点以及长时间检测的需求，一次实验得到大量数据，解放双手，灵敏度高，重复性好，死亡比例差距很小仍能得到确切结论。

2 连续六轮杀伤的魔改T细胞

免疫细胞杀伤是Incucyte® 比例最高的应用。随着免疫治疗产业的发展，CAR-T和TCR-T等细胞疗法也进入大众的耳中，这些细胞是由患者自身或通用型的T细胞改造而来，但T细胞杀伤能力会随着杀伤过程逐渐衰减。

Nature的一篇文章通过改造T细胞基因，提高细胞持续杀伤能力，使效率更高。来自Gladstone–UCSF基因免疫学研究所的科研人员^[4]，通过CRISPR基因编辑方法发现敲除RASA2基因可以使得T细胞在多种免疫抑制剂存在的情况下依然能保持增殖，敲除后的T细胞不仅杀伤效果强，杀伤持续时间也比对照组强（图2左），在连续六轮杀伤的过程中，杀伤作用依旧明显（图2右）。

图2. 评估不同效靶比，不同CD19表达量的肿瘤细胞的杀伤作用，Incucyte® 检测和计算死细胞染料Annexin V的荧光面积，发现改造T细胞在靶点表达量非常低的情况下，仍然具有良好的杀伤效果（左），且连续六轮杀伤后杀伤作用依旧明显（右）。

陈老湿解读：Incucyte® 是真正的活细胞成像仪，可以监测到几个星期到几个月的细胞生长与形态等信息的连续变化。

3 新晋诺奖得主发文发现病毒感染关键因子

瑞典当地时间2022年10月初，美国科学家卡罗琳·贝尔托西 (Carolyn R. Bertozzi)等人荣获2022年诺贝尔化学奖。这位诺贝尔奖获得者在9月8号，在Sciense发表研究论文^[5]，通过基因组规模的CRISPR筛选与鉴定，最终发现溶酶体酶运输因子（Lysosomal Enzyme Trafficking factor, LYSET）对依赖组织蛋白酶的病毒的感染至关重要。

为验证LYSET是病毒感染的关键因子，研究者构建表达埃博拉病毒糖蛋白的带有绿色荧光蛋白的水泡口炎病毒（VSV-EBOV-GP），之后应用赛多利斯Incucyte® 实时活细胞分析系统获得病毒侵染的实验结果（图3）。后续研究人员构建了VSV-SARS-COV-2，同样应用Incucyte® 在HAP1、Primary Fibroblasts、A549等细胞系中得到一致结论。

图3. GFP绿色荧光表达评估病毒侵染情况，Incucyte® 连续监测12h的病毒侵染情况，间隔1h，方便且高效，趋势明显，平行性好。野生型第4天开始感染，单LYSET敲除的细胞12h内都未发生病毒感染。

陈老湿解读：诺奖获得者是Incucyte® 的忠实粉丝，用Incucyte® 发过多篇高影响因子文章。本文有大量Incucyte® 视频与图片数据，不仅是趋势分析，就是图片清晰度也可以发Science!

4 空间转录组技术助力黑色素瘤细胞的生长和转移机制

黑色素瘤是一种高度恶性肿瘤，具有高度异质性和可塑性。来自比利时鲁汶VIB癌症生物学中心的研究人员结合多种测序技术，阐明促进肿瘤生长和转移的关键因素^[6]。作者利用空间转录组技术，证实黑色素瘤细胞新亚群pre-EMT NC茎样群的存在，为证实此亚群对肿瘤生长及转移的作用。体外实验中，作者利用肿瘤球模型，且与内皮细胞（EC）共培养，使用Incucyte® 实时监测肿瘤球的生长状况，验证了内皮细胞促进黑色素瘤的生长的结论。对于肿瘤球或类器官等体外3D实验，Incucyte® 自动对焦，拍摄多层图片叠加生成单张清晰图片，解决了3D样品内部对焦不清的问题以及类器官长时程培养监测繁琐的难题。

陈老湿解读：Incucyte® 的3D拍摄全自动化，不用手动调焦，您只需要放入培养板，后面的事情就交给Incucyte® 吧！

参考文献及2022 Incucyte® CNS文献一览表

1.ADAR1 averts fatal type I interferon induction by ZBP1.nature

2.ADAR1 mutation causes ZBP1-dependent immunopathology.nature

3.ADAR1 prevents autoinflammation by suppressing spontaneous ZBP1 activation.nature

4.RASA2 ablation in T cells boosts antigen sensitivity and long-term function.nature

5.The human disease gene LYSET is essential for lysosomal enzyme transport and viral infection.

6.A cellular hierarchy in melanoma uncouples growth and metastasis.nature

7.Magnesium sensing via LFA-1 regulates CD8+ T cell effector function.cell

8.Modular design of synthetic receptors for programmed gene regulation in cell therapies.CELL

9.Enhanced safety and efficacy of protease-regulated CAR-T cell receptors.CELL

10.Reciprocal cell-ECM dynamics generate supracellular fluidity underlying spontaneous follicle patterning.cell

11.Cholesterol and matrisome pathways dysregulated in astrocytes and microglia.cell

12.Tissue-resident memory and circulating T cells are early responders to pre-surgical cancer immunotherapy

13.Sublethal cytochrome c release generates drugtolerant persister cells.cell

14.Targeting SWI/SNF ATPases in enhancer-addicted prostate cancer.Nature

15.Effective drug combinations in breast, colon and pancreatic cancer cells.nature

16.Altered TMPRSS2 usage by SARS-CoV-2 Omicron impacts infectivity and fusogenicity.nature

17.A genome-scale screen for synthetic drivers of T cell proliferation.nature

18.CAR T cell killing requires the IFNγR pathway in solid but not liquid tumours.nature

19.Generation of 3D lacrimal gland organoids from human pluripotent stem cells.nature

20.CCNE1 amplification is synthetic lethal with PKMYT1 kinase inhibition.nature

21.Young CSF restores oligodendrogenesis and memory in aged mice via Fgf17.nature

22.Targeting SLC7A11 improves efferocytosis by dendritic cells and wound healing in diabetes.nature

23.PHGDH heterogeneity potentiates cancer cell dissemination and metastasis.nature

24.Potentiating adoptive cell therapy using synthetic IL-9 receptors.nature

25.Mechanisms of APOBEC3 mutagenesis in human cancer cells.nature

26.Activation of γ-globin expression by hypoxia-inducible factor 1α.nature

27.p53 directs leader cell behavior, migration, and clearance during epithelial repair.science

28.Enhanced T cell effector activity by targeting the Mediator kinase module. Science

《实时活细胞分析开启免疫细胞杀伤实验新格局》