组织自发荧光淬灭剂-操作指南

组织自发荧光淬灭剂-操作指南

描述：许多组织会产生可透过各种波长滤光片的内源性自发荧光，显著干扰抗体标记荧光观察甚至导致免疫组化染色失败。自发荧光淬灭试剂中的离子可通过碰撞方式捕获自发荧光光源分子发出的电子，阻止该电子从激发态回归基态和能量释放，从而淬灭自发荧光。采用优化的孵育时间，可以最大限度地消除自发荧光而不明显影响抗体标记的荧光。


 

适用：各种组织、细胞免疫荧光染色的自发荧光消除。特别适用于神经组织自发荧光淬灭。

储存：4 ºC避光。

使用方法：

以下步骤在免疫荧光组化染色完毕之后(而非在荧光染色完毕之前)执行。对特定的组织和细胞类型，必需优化孵育时间以便最大限度淬灭自发荧光而不明显影响抗体标记的荧光(步骤2)。请仔细阅读后面的说明。

1. 吸去PBS或相应洗涤缓冲液，用蒸馏水短暂冲洗组织切片或细胞培养板中的细胞。

2. 加入适量但充足的自发荧光淬灭剂覆盖组织切片或瓶皿中的细胞。室温孵育10-90min。

3. 吸去自发荧光淬灭剂，用蒸馏水短暂冲洗。

4. 吸去蒸馏水，用PBS覆盖组织切片或位于细胞培养板中的细胞。

5. 封片。建议使用抗荧光衰减封片剂。该封片剂可防止抗体标记荧光衰退。

6. 荧光显微镜观察。

说明：

1.   不同物种不同类型组织的自发荧光具有不同的特征，使用组织自发荧光淬灭剂的效果可能会有差别。另外，任何针对自发荧光的淬灭，将会在一定程度上降低抗体荧光强度。所幸的是该试剂对自发荧光的淬灭程度远远超出抗体荧光强度的降低，因而能在二者之间获得较好的平衡。由于不很清楚的原因，本试剂对于消除脑脊髓神经组织的自发荧光具有更好的效果。

2.   为获得最佳效果，必需优化孵育时间以便最大限度淬灭某一特定组织的自发荧光而不明显影响抗体标记的荧光(步骤2)。重要的标本应在确定最佳孵育时间之后使用本试剂。进行优化时，可取数张组织切片或位于培养皿中的细胞，在免疫荧光组化染色完毕之后加入组织自发荧光淬灭剂，孵育5、10、30、60、90分钟等不同时间，冲洗后观察荧光。如果组织自发荧光仍然很强，可延长孵育时间；如果孵育时间小于10分钟而荧光消退十分明显，可将孵育时间减少为1-5分钟，或者取少量的组织自发荧光淬灭剂加等份的双蒸水稀释，然后孵育10-90分钟进行优化。

3.   组织自发荧光淬灭剂必须在完成免疫荧光组化染色后使用，否则将严重降低抗体荧光。