血清沉淀会导致细胞污染吗?一般情况下,正常的沉淀物不会导致细胞污染。但多数情况下,血清沉淀会对我们判断细胞是否出现污染造成困扰。絮状沉淀容易和真菌、细菌混淆;磷酸钙沉淀引起的小黑点容易与支原体污染混淆。
细胞培养中血清沉淀从何而来?
刚出厂的血清,应该是澄清透明的,为了保证品质,血清会储存在-20℃的环境中。如果运输过程中,出现了温度忽高忽低,反复冻融的情况,就容易析出大量沉淀。另外,不正确的解冻方法也会引起血清产生大量沉淀。
细胞培养中如何减少血清沉淀?
1、正确的运输温度:运输过程中,要严格-20℃低温,避免反复冻融。
2、使用正确的融化方法:在使用时,正确的解冻方法也很重要,这里推荐使用国际上通用的“三步法”解冻。
需要注意的是,如果血清是储存在-80℃冰箱中,正式解冻前应先转移至-20℃冰箱中过渡。
一次解冻后,分装至无菌离心管中,尽量保证每管是一次的用量,分装管解冻也遵循三步法,解冻后需全部用完。
3、使用正确的储存方式:长期储存在 2-8℃或在室温下放置时间过长,都会引起沉淀,建议配制好的培养基在4℃冰箱中存放不要超过7天,血清分装好后-20℃储存。
4、特殊的处理:γ射线照射与热灭活也容易引起沉淀析出,因此要注意射线照射剂量以及热灭活方法(40℃水浴加热20分钟即可)。
细胞培养中如何去除沉淀?
如果要除去血清中的沉淀,可以将血清分装至无菌离心管中,大约400g 离心,留上清即可。由于滤膜容易被沉淀堵塞,因此不建议用过滤的方法。
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