GB 23200.57-2016 食品安全国家标准

食品中乙草胺残留量的检测方法

前言

本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草。

本标准代替SN/T 2322-2009 《进出口食品中乙草胺残留量检测方法》。与SN/T 2322-2009 相比，主要变化如下：

——标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式；

——标准名称中“进出口食品"改为“食品"；

——标准范围中增加“其他食品可参照执行"。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为：

——SN/T 2322-2009。

1范围

本标准规定了食品中乙草胺残留量的气相色谱测定、气相色谱-质谱法确证和制样方法。

本标准适用于花生、大豆、玉米、小麦、洋葱、海菜.鸡肉、猪肉、腰果和松茸中乙草胺残留量的测定，其他食品可参照执行。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不ke少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB 2763食品安全国家标准 食品中农药最大残留xian量

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

试样中的乙草胺残留物用乙腈或乙酸乙酯提取，经凝胶渗透色谱仪（GPC）和（或）硅胶固相萃取柱（SPE）净化，用气相色谱法（GC）测定和气相色谱-质谱法（GC-MS）确证，外标法定量。

4试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。

4.1试剂

4.1.1 正已烷（C6H14）。

4.1.2乙酸乙酯（C4H8O2）。

4.1.3 环已烷（C6H12）。

4.1.4 乙腈（C2H3N）。

4.1.5丙酮（C3H6O）。

4.1.6无水硫酸钠（Na2SO4）：经650℃灼烧4 h，储于密封容器中备用。

4.2溶液配制

4.2.1乙酸乙酯-正已烷（3+ 97，体积比）：取30 mL乙酸乙酯，加入970 mL正已烷，摇匀备用。

4.2.2乙酸乙酯-正已烷（5+95，体积比）：取50 mL乙酸乙酯，加入950 mL正已烷，摇匀备用。

4.3 标准品

4.3. 1乙草胺标准品（acetochlor，C14 H20ClNO2，CAS号：34256-82-1）：纯度≥98%。

4.4标准溶液配制

4.4. 1乙草胺标准溶液：称取适量的乙草胺标准品，用丙酮配成浓度为100μg/ mL的标准储备液。根据需要将标准储备溶液用正已烷稀释成适当浓度的标准工作液。标准储备液和标准工作液在0℃~4℃条件下避光储存。有效期6个月。

5仪器与设备

5. 1气相色谱仪： 配微池电子捕获检测器（μ-ECD）。

5.2气相色谱质谱仪： 配电子轰击源（EI）。

5.3凝胶渗透色谱仪。

5.4旋转蒸发仪。

5.5 离心机：5000 r/ min。

5.6高速均质器。

5.7硅胶固相萃取柱：6 mL/ 1000 mg，或相当者；使用前用10 mL正已烷淋洗。

5.8离心管：100 mL，塑料和玻璃。

5.9滤膜：0. 45μm，有机相。

5.10分析天平：感量0.01g和0.0001g。

6试样制备与保存

6.1取样部位

样品取样部位按CB 2763的规定执行。

6.2蔬菜类、食用菌类

6.2.1取洋葱等有代表性辛辣蔬菜祥品500g，将其切成小块。装入洁净的容器内，密闭并标明标记。- 18℃以下保存。

6.2.2取有代表性蔬菜样品（洋葱等辛辣蔬菜除外）和松茸等有代表性食用菌样品500 g将其用捣碎机加工成浆状。混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记。-18℃以下保存。

6.3海菜

取有代表性海菜样品500 g，切碎后，用捣碎机加工成浆状。混匀，装入清净的容器内，密闭并标明标记。-18℃以下保存

6.4粮谷和坚果类

取花生、玉米、小麦、大豆、腰果等有代表性样品500 g，用粉碎机粉碎，混勾，装入洁净的容器内，密闭并标明标记。4℃以下保存。

6.5 动物源类

取鸡肉、猪肉等有代表性样品500g，用绞肉机绞碎，混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记。-18℃以下保存。

7测定步骤

7.1 提取

7.1.1 粮谷、坚果

称取试样10 g（精确至0.1 g）于100 mL塑料离心管中，加入50 mL乙腈，在匀浆器上匀浆2 min。以4000r/min离心10min，将上清液倒入浓缩瓶中，浓缩至干，用10mL乙酸乙酯-环已烷溶液溶解残渣，过膜，供凝胶渗透色谱（GPC）净化。

7.1.2 禽肉组织

称取试样10g（精确到0.1g）于100mL塑料离心管中，加入5g无水硫酸钠，搅拌均匀，加入50mL乙腈，在匀浆器上匀浆2min。以4000r/min离心10min，将上清液用无水硫酸钠脱水后倒入浓缩瓶中，浓缩至干，用10 mL乙酸乙酯-环己烷溶液溶解残渣，过膜，供凝胶渗透色谱（GPC）净化。

7.1.3 洋葱

称取试样5 g（精确至0.1g）于100 mL玻璃离心管中，在700 W消解功率下微波消解40s。恢复至室温，加入50mL乙酸乙酯，在匀浆器上匀浆2min。以4000r/min离心10min，将上清液倒入浓缩瓶中，浓缩至干，用1mL正已烷溶解残渣，供固相萃取柱净化。

7.1.4 海菜、松茸

称取试样5g（精确至0.1g）于100 mL玻璃离心管中，加入50 mL乙酸乙酯，在匀浆器上匀浆2min。以4000r/min离心10min，将上清液倒入浓缩瓶中，浓缩至干，用1mL正已烷溶解残渣，供固相萃取柱净化。

7.2 净化

7.2.1凝胶渗 透色谱净化条件

a） 色谱柱：S- X3； 20 cm×2 cm（内径） ，或相当者；

b） 流动相：环已烷-乙酸乙酯（1+1，体积比）；

c） 流速：5.0 mL/ min；

d） 进样量：5.0 mL；

e） 淋洗体积：40 mL；

f） 收集体积：30 mL；

g） 清洗体积：10 mL。

7.2.2 凝胶渗透色谱净化

将7.1中粮谷、坚果和禽肉组织的提取液过滤膜注入凝胶渗透色谱仪中，收集40mL~70mL流出液，在40℃水浴上减压浓缩至干，用1 mL正己烷溶解残渣，供固相萃取柱净化。

7.2.3 硅胶固相萃取柱净化

将7.1中洋葱、海菜、松茸提取液和7.2.2中净化液注入硅胶固相萃取柱中，再分2次，每次1mL正已烷润洗盛样液容器，注入硅胶柱中，依次用10mL正已烷、5mL乙酸乙酯-正己烷溶液和5mL乙酸乙酯-正己烷溶液淋洗，再用15mL乙酸乙酯-正己烷溶液洗脱，收集洗脱液于40℃水浴减压浓缩至干，用正己烷定容至5 mL，供气相色谱测定和气相色谱-质谱确证。

7.3 测定

7.3.1气相色谱参考条件

a） 色谱柱：DB-5石英毛细管柱，30 m×0.32 mm（内径），膜厚0.25μm，或相当者；

c） 进样口温度：250℃；

d） 检测器温度：325℃；

e） 载气：氦气，纯度≥99.995%，1.8mL/min；

f） 进样量：1μL；

g） 进样方式：无分流进样，0. 75 min后开阀。

7.3.2 气相色谱-质谱参考条件

a）色谱柱：DB-5MS石英毛细管柱，30 m×0.25 mm（内径） ，膜厚0. 25μm，或相当者；

c） 进样口温度：250℃；

d） 色谱-质谱接口温度：280℃；

e） 载气：氦气，纯度≥99.995%，1.0 mL/min；

f） 进样量：1μL；

g） 进样方式：无分流进样，0.75 min后开阀；

h） 电离方式：EI；

i） 电离能量：70eV；

j） 测定方式：选择离子监测方式（SIM） ；

k） 监测离子（m/z）：定量162，定性174、234、269；

l） 溶剂延迟：3 min。

7.3.3气相色谱测定

根据样液中乙草胺含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中乙草胺响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积穿插选样测定。在上述色谱条件下，乙草胺的保留时间约为12. 3 min。标准品的色谱图参见图A.1。

7.3.4 气相色谱- -质谱确证

乙草胺标准溶液及样液均按7.3.2规定的条件进行测定，如果样液与标准溶液相同的保留时间有峰出现，则对其进行质谱确证。经确证分析被测物SIM色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，所选择的离子均出现；选择离子m/z 162、174、234、269（其丰度比为100：54：24：8）与标准样品相关离子的相对丰度不一致，相似度在允许偏差之内（见表1），则可判定样品中存在乙草胺。乙草胺标准品总离子流色谱图、选择离子质谱图和全扫描质谱图参见图A.2图A. 3和图A.4。

表1 GC- MS确证相对离子丰度的最大允许偏差

8结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中乙草胺的含量。计算结果需将空白值扣除。

式中：

X——试样中乙草胺的含量， 单位为毫克每千克（mg/kg）；

c——标准工作液中乙草胺的浓度单位为微克每毫升（μg/ mL）；

A——样品溶液中乙草胺的峰面积；

As——标准工作溶液中乙草胺的峰面积，

V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；

m——最终样液所代表的试样量， 单位为克（g）。

计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留2位有效数字。

9精密度

9.1在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录B的要求。

9.2在再现性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录C的要求。

10 定量限和回收率

10.1 定量限

本方法的定量限均为0. 01 mg/ kg。

10.2 回收率

气相色谱法检测样品的添加浓度及回收率数据参见表D.1，气相色谱-质谱法检测样品的添加浓度及回收率数据参见表D.2。