在生物技术领域，离子交换色谱被广泛应用于电荷差异蛋白的分离，包括单克隆抗体（MAbs），其原理基于流动相梯度变化的离子强度对蛋白大分子的作用力的差异，而到达分离蛋白电荷异构体的目的。MAbs作为生化药物已经在治疗很多疾病的过程中发挥至关重要的作用，尤其是在癌症的治疗方法，已经商品化的MAbs药物包括罗氏公司的帕妥珠单抗、诺华公司的依维莫司等等。

MAbs药物的每个生产环节过程中，必须采用适合的方法进行产品的纯化和质量控制，测定其效价、聚集体和电荷亚型变体。电荷亚型变体是在生产过程中产生的，这些副产物会产生与主产品不同的药效，有时会引起严重的副作用。因此本文采用离子交换色谱的方法对MAbs进行分离分析，同时考察了不同色谱条件对分离的影响。各分离模式下柱温均为25 ℃，检测波长214 nm和280 nm，流速为1.0 mL/min。

（1）离子交换色谱条件：色谱柱1：ProPac WCX-10，10 µm，4×250 mm， P/N：054993；色谱柱2：MAbPac SCX-10，10 µm，4×250 mm， P/N：074625；流动相：A：20 mmol/L MES，用NaOH调节pH=5.5； B：20 mmol/L MES，0.25 mol/L NaCl，用NaOH调节pH=5.5；进样量：10 µL梯度条件见表2-19：

（2）疏水作用力色谱条件：色谱柱：ProPac HIC-10，10 µm，4×250 mm， P/N：074197；流动相：A：0.02 mol/L 醋酸钠，调节pH= 7.0， 2 mol/L (NH4)2SO4； B：0.02 mol/L 醋酸钠，调节pH=7.0梯度条件见表2-20

分别采用离子交换色谱（图2-27）和疏水作用力色谱（图2-28）分析MAbs样品，在IEC分离模式下，MAbs出现六个显著的色谱峰，它们之间存在电荷差异，依据电荷的差异在流动相盐梯度的条件下进行分离，这些色谱峰为单抗的电荷变体，说明客户提供的样品变体含量较高；而在HIC分离模式下（图2-28），出现一个色谱峰，主要原因是MAbs和固定相、流动相之间以疏水作用力大小进行分离，而MAbs电荷的差异对其没有影响，因此针对不同的分离目的，采用合适的分离模式是比较重要的。比较了MAbs在MabPac SCX-10和ProPac WCX-10两根色谱柱上的分离结果，色谱柱规格一致（4×250 mm），粒径均为10 µm，虽然样品浓度有差异，整体色谱图比较接近，因此在分离MAbs样品时，MabPac SCX-10也是一款较合适的色谱柱。