紫外可见分光分度计具有灵敏度高、操作简便、快速等优点,是生物化学实验中常用的实验方法。许多物质的测定都采用分光光度法。在分光光度计中,将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时,便可得到与不同波长相对应的吸收强度。
紫外可见分光分度计的吸光度范围应该是在0.3-0.7之间,一般在0.2-0.8的范围里准确。在分析过程中,很多人都是做一条标准曲线,然后去测定样品,很少有人关心误差方面的问题。
在分光分析中,化学条件引起的误差比较大,有关吸光度测量的误差,很多人都从书上看的,认为吸光度在0.2-0.8之间误差小,在0.434处最小,但不是特清楚理论根据。还有一个问题,如果吸光度在2.0,难道我们就去稀释样品,让其吸光度在0.2-0.8的范围内吗?反之,如果吸光度在0.02,那我们是不是要浓缩样品呢?
对此有两种不同的看法:
1.如果吸光度不在0.2-0.8之间,我们要去稀释或浓缩样品来进行测量;
2.如果吸光度不在0.2-0.8之间,直接进行测量,因为稀释或浓缩样品产生的误差远远大于直接测量吸光度产生的误差。
在分光光度计中,透射比的标尺是均匀的。吸光度与透射比为负对数关系,所以吸光度的标尺刻度是不均匀的。因此,对于同一台仪器,读数的波动对透射比来说,应基本为一定值;而对吸光度来说,它的读数则不在为定值。由分光光度计读数标尺上吸光度与透射比的关系可以看出,吸光度越大,读数波动所引起的吸光度误差也越大。
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