Protein A 和 G 色谱柱对抗体均具有高亲和性，因此它们仅结合细胞培养上清液中的抗体。然而，它们的选择性各有不同。例如，Agilent Bio-Monolith Protein A 色谱柱对人 IgG1、IgG2 和 IgG4 亚型具有高亲和力，对 IgG3 没有亲和性，而 Agilent Bio-Monolith Protein G 色谱柱对人 IgG1、IgG2、IgG3 和 IgG4 亚型都具有高亲和力。IgG1 凭借其稳定性（半衰期较长）、在血清中的丰度以及较少出现聚集，成为最常用的生物治疗药物。通常不使用 IgG3，因为它容易聚集且不太稳定。相反，Protein G 色谱柱对人亚类单克隆抗体（例如 IgA 和 IgD）没有亲和性，但是 Protein A 色谱柱能够与这些抗体结合（表 1）。这些色谱柱相互补充，Protein G 对不与 Protein A 结合的 mAb 具有亲和性，反之亦然（图 1）。因此，它们能够实现目前作为生物治疗药物进行开发的各种 mAb 亚类和片段的滴度测定。

*Protein A 和 G 对不同抗体的相对亲和性表示法：++++ = 强亲和性，+++ = 中等亲和性，++ = 弱亲和性，+ = 微弱亲和性，- = 无亲和性。

亲和色谱的样品前处理方法与 HPLC 蛋白质分析的样品前处理方法类似。进样前需要极少的样品前处理，以优化色谱柱性能并延长色谱柱寿命。

Agilent Bio-Monolith rProtein A（重组 Protein A）分析柱是 Bio-Monolith 和亲和色谱家族的新成员。该色谱柱可用于高速分析单克隆抗体 (mAb) 滴度和小规模纯化，并可轻松集成到二维液相色谱等其他分析工作流程中。本研究以最大流速测试了重组 Protein A 色谱柱，证明了一种色谱结合/洗脱法可用于测定 mAb 滴度，该方法具有非常短的运行时间（1 分钟），适用于克隆筛选、工艺开发及优化等高通量应用。

此外，本篇应用文集中还包含使用 Agilent Bio-Monolith Protein A HPLC 色谱柱缩短定量分析人 IgG 的分析周期、使用 Agilent Bio-Monolith Protein A 色谱柱和 LC/MS 进行的细胞培养优化等应用简报供您查阅。