细胞中的小黑点是如何产生的？如何避免？

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细胞中的小黑点是如何产生的？如何避免？

来源：苏州海星生物科技有限公司 2022年10月21日 17:05

在正常培养细胞的情况下，我们时常会发现细胞出现一些小黑点，有些小黑点随着细胞数量的增长而增长，有一些则不会，那么这些小黑点到底是什么？会影响细胞增长吗？

| 细胞培养中出现的小黑点可以分为以下几类：

1. 细胞碎片

在细胞培养中不合适操作引起的化学或物理上的刺激，例如胰酶消化时间过长，会导致细胞死亡，从而产生很多碎片。

2. 凋亡小体

在体外培养条件下，细胞很容易受到环境改变的影响，诱发细胞的凋亡，产生凋亡小体。

3. 血清中的沉淀

经过热处理的血清中，作为常见沉淀物质的磷酸钙会显著增多，且由于布朗运动会看上去可以活动。

4. 支原体污染

由于支原体的污染，导致出现的小黑点，明显影响细胞增长。

| 细胞培养过程中如何避免产生小黑点？

悬浮细胞：

收集细胞上清慢速离心（500~600 rpm/min，5~6 min）并更换新的培养瓶。

贴壁细胞：

将细胞用 PBS 洗 2~3 遍，洗的时候，轻轻拍打培养瓶，让贴壁不牢的碎片和颗粒脱落，再弃去 PBS，消化时先加低浓度的胰酶如 0.05% 胰酶消化 1 min 左右，让细胞间隙中的颗粒和碎片脱落下来，去掉低浓度胰酶，然后正常消化细胞，将收集的细胞悬液慢速离心（500~600 rpm/min，5~6 min）并更换新的培养瓶，并可以尝试适当增加血清浓度进行培养。

如果怀疑黑点是支原体污染，可进行支原体检测，检测阳性请及时将细胞处理后丢弃。比较珍贵的细胞，可以尝试使用支原体清除剂（Hycyte™支必清支原体清除试剂盒）去除，并与其他细胞分开培养。

小黑点和微生物污染的区别
	细胞碎片/分泌物	微生物污染
形态	大小不一的黑色圆点，或不规则形状	圆球状或杆状，形态非常规则
是否运动	原地震动，布朗运动或相对液体静止	快速游动，快速转圈或相对液体静止
分布情况	视野中分布无规律	视野中分布均匀
增长情况	无抗生素条件下不增多或缓慢增多	无抗生素条件下48-72小时内爆发式增多

| 注意事项：

1. 掌握细胞传代的状态较好时机，不要细胞长老了再传代；

2. 掌握好消化时间，防止消化过度产生细胞碎片；

3. 减少血清等试剂的冻融次数；

4. 将培养液的 PH 调到好；

5. 严格控制水质和器皿的清洁。

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