荧光显微镜光源以及荧光显微镜激发荧光方式介绍

荧光显微镜是利用特定波长的激发光照射被检物体产生荧光进行镜检的显微光学观测技术，是医院科研、病理、检验等部门常用的医用光学仪器之一。有些物质受紫外线照射后可发荧光，另有一些物质需要用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，可以观察到普通显微镜看不到的细节，大多数实验室都有配备高质量或者常规的显微成像系统，但是调整荧光，校正难度较高，因此需要了解荧光显微镜激发荧光的方式。

按光的波长范围分为UV激发法(使用紫外线照明法)和BV激发法(使用蓝紫光)两种。

UV激发是用短于400nm紫外光进行激发。该法不存在可见的激发光，所以被观察的荧光呈现该染料固有的荧光，容易判别标本上的特异荧光和背景组织的自身荧光。

BV激发是以404nm、434nm为中心的由紫外至蓝光进行激发。适合使用蓝光照射标本，用蓝光作为激发光，荧光色素的吸收效率较高，可得到较明亮的图像。

BV激发时要注意以下2点：

①荧光显微镜的截止滤光片要使用可*阻断蓝光并可充分通过所需绿、黄荧光的滤光片；

②500nm以下的荧光无法看到，而500nm以上会使整个图像显黄色。

因此，荧光显微镜的照明可根据聚光器的构造和激发光的波长按以下三点考虑。

①从荧光像的反差要求来看，UV激发暗场聚光器照明。
②以像的亮度来考虑，BV激发滤光片暗场观察效率很高。

③UV激发滤光片暗场观察和BV激发暗场聚光器照明的特性，可看作介于这两种照明方法之间，但前者滤光片暗场的性质较强，显示图像较明亮，反差小；后者因保留暗场光路的性质，故显示图像较暗，而反差有所改善。当实际使用荧光显微镜时，应采用合适标本要求的照明法进行观察。

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