Dewetting孔去湿现象

      在方法开发时需要考虑的一个重要因素就是固定相的“孔去湿”。当固定相为高疏水（如C18），且流动相从一个高有机相组分（>40%乙腈或甲醇）变到另一个纯水相或高水相组分的时候，就容易发生。这也是早期反相色谱柱常常遇到的问题。

      色谱柱在高压条件下，流动相中的水会被“压入”起保留作用的固定相孔结构里；当泵停止后，水则不会再进入固定相孔内。同时，由于固定相是疏水的，滞留于色谱柱中的水被从固定相孔结构中排出。在重启色谱泵后，即使是高压也无法使流动相中的水重新回到固定相孔内，从而导致样品的保留时间迅速变短，分离度明显下降。

      暂无研究表明纯水/高水会导致碳链倒塌，孔去湿的主要原因填料孔表面的疏水性。发生孔去湿现象的色谱柱，在经过40%以上有机溶剂长时间冲洗后，是可以恢复的。

      孔去湿现象的发生跟填料孔径、键合密度和键合相都有关系，除了HALO C18，HALO其他所有固定相都能在水相条件下使用，不会发生“孔去湿”现象。

      下方图M演示了当HALO C18发生“孔去湿”现象时色谱峰的变化。相比之下，HALO AQ-C18所具有的极性特征会保护它防止发生“孔去湿”现象，如图 M 所示，泵重启前后，HALO AQ-C18的保留和分离基本保持不变。