另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。

　　下面让我们一起来了解一下生物荧光显微镜的使用方法及注意事项吧。

　　一、使用方法

　　(1)打开灯源，超高压汞灯要预热15min才能达到最亮点。

　　(2)透射式荧光显微镜需在光源与暗视野聚光器之间装上所要求的激发滤片，在物镜的后面装上相应的压制滤片。落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片、双色束分离器、压制滤片的插块。

　　(3)用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。

　　(4)放置标本片，调焦后即可观察。使用中应注意:未装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤;用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊镜油;高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需待汞灯*冷却后才能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。

　　(5)观察。例如:在荧光显微镜下用蓝紫光滤光片，观察到经0.01%吖啶橙荧光染料染色的细胞，细胞核和细胞质被激发产生两种不同颜色的荧光(暗绿色和橙红色)。

　　二、注意事项

　　(1)严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序。

　　(2)应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯5~15min，待光源发出强光稳定后，眼睛*适应暗室，再开始观察标本。

　　(3)防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。

　　(4)检查时间每次以1~2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱;标本受紫外线照射3~5min后，荧光也明显减弱;所以，最多不得超过2~3h。

　　(5)荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。

　　(6)标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。长时间的激发光照射标本，会使得荧光衰减和消失现象，故应尽可能缩短照射时间。暂时不观察时可用挡光板遮盖激发光。

　　(7)标本观察时候应采用无荧光油，应避免眼睛直视紫外光源。

　　(8)电源应安装稳压器，电压不稳会降低荧光灯的寿命。

　　荧光显微镜与光学显微镜的区别

　　荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别:

　　1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上;

　　2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜;

　　3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。

　　荧光显微镜也是光学显微镜的一种，主要的区别是二者的激发波长不同。由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。

　　荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。