该细胞从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立。该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞,细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白,表达C3R和FcR;可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化;可作为转染宿主。
➊ 补液法:培养基变黄时可补加适量(1~2mL)新鲜培养基,补加1-2次之后,用离心的方式全部换液,离心1200rpm (约250g)3分钟。
➌ 如果换液后第二天培养基就变得很黄,同时镜下检查未污染,说明细胞密度大,应该传代。
➊ 摇晃培养瓶,把细胞摇匀,均分到两个瓶子里,每瓶再补充等量培养基。
THP-1细胞复苏后通常需要3-5天恢复状态,建议复苏后48小时内不要进行操作。
THP-1培养常见问题及解决方法
➊ 培养基里一定要加β-巯基乙醇( β-mercaptoethanol)吗?
β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂,有抗氧化的作用,可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时,可适当增加巯基乙醇的比例(不超过标准量的1.5倍)。
➋ 悬浮细胞在镜下观察时,难以聚焦或估算密度怎么办?
悬浮细胞会随着液体流动,不容易聚焦,静置5-10分钟使细胞沉底,之后再轻轻放上显微镜观察,将有助于聚焦和估算细胞密度。
➌ THP-1细胞在培养过程中细胞发生聚团怎么办?
少量细胞聚团,呈葡萄串状,属于正常现象,特别是细胞密度较低时,易出现这种情况。更换血清品牌或增大血清比例(不超过20%)有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散,等待密度高时,会自己分散开。
➍ THP-1细胞在培养过程中细胞发生贴壁怎么办?
少量细胞贴壁属于正常情况,将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%,说明细胞生长环境有异常,需排查培养箱设置、培养基成分,以及培养器皿是否异常。
[THP-1细胞在密度较高时不聚团]
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