应用Ibidi伤口愈合插件进行共培养“伤口愈合”实验,对周细胞与肺微血管内皮细胞做共培养迁移试验。
实验步骤:
1)铺细胞(图二)
将ibidi伤口愈合培养皿底部的保护胶带撕除。在ibidi细胞插件的每孔中分别加入1.5 ×104的PMVECs和Pericyte的细胞悬液。注意不要大力晃动培养皿。以防止细胞不均匀。在37℃培养箱中孵育
图二,ibidi伤口愈合插件中加入细胞
2)形成“划痕”
采用无血清培养基饥饿细胞16小时。如图四所示,小心的用镊子夹住插件的一个角,将插件移除。
图三,移除插件
移除插件后,要用显微镜检查是否形成合格的“划痕”。
小心的清洗细胞,之后加入2ml培养基进行培养(图四)
采集并分析图像:
在显微镜下选取能同时看到“划痕”和两边细胞的视野进行成像,“划痕”的方向最好是水平或者垂直。
采集0h和6h的图像,观测细胞的迁移率和细胞迁移方向,用中性粒周蛋白定位微管生长中心(MTOC)并用鬼笔环肽标记F-actin
由图可见,相对于左侧的对照,右边的PAH来源的Pericytes迁移距离较短,并且从荧光标记图上可见,红色箭头表示迁移的方向,PAH组无特定方向,不受PMVEC的影响。柱状图为统计结果。
相关产品
免责声明
- 凡本网注明“来源:化工仪器网”的所有作品,均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:化工仪器网”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源(非化工仪器网)的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品第一来源,并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。