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在前几期，我们重点为大家介绍并推荐了适用于中草药检测的各类安捷伦色谱柱，以便大家在日后的检测工作中匹配使用。本期将继续带来适用于葛根配方颗粒检测的色谱柱推荐，跟上我们，精彩继续！
Agilent 在 2003 年首家推出了亚 2 微米粒径的色谱柱，由此掀开了超高效液相色谱分离（UHPLC）的序幕。ZORBAX 系列的 UHPLC 色谱柱中，分为快速高通量分离（RRHT）和超高压快速高分离度（RRHD）两个系列，高压力耐受分别为 600bar 和 1200bar。ZORBAX RRHD Plus C18 和 SB C18 是中药配方颗粒中常用 UHPLC 色谱柱。本实验选用的色谱柱 ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18，其固定相表面通过致密键合和双封端处理，对中药中生物碱、皂苷、黄酮、萜类等成分具有优异的峰形和分离度。
根据国家药品监督管理局 《国家药品标准》中葛根配方颗粒的检测项目，对其特征谱图和含量测定都采用 UHPLC 方法。特征谱图和含量测定中要求理论板数按葛根素峰计算应不低于 4000，供试品呈现的特征峰保留时间应与对照品相对应，相对保留时间在规定范围内（±10%）。本文采用 1290 Infinity II 超高效液相色谱仪以及 ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18 ，2.1x100mm，1.8μm 色谱柱对葛根配方颗粒的特征谱图进行了分析，并对葛根配方颗粒中葛根素的含量进行了测定。此外，我们也对该方法进行了加速，能够实现更快速的分析。
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特征谱图
实验结果
图 1. 葛根配方颗粒标准对照谱图、供试品重现谱图、色谱柱替代后供试品特征谱图及方法再加速的供试品特征图谱比较 （峰 3(S):葛根素；峰 8:黄豆苷元）
色谱条件：
标准方法：
✓
色谱柱：BEH C18 (2.1x100mm, 1.7 μm)
✓
流动相：A：乙腈；B：H2O（0.1%磷酸）
✓
梯度：0-10min,94%-91%B；10-14min,91%B-89%B；14-22min,89-70%B；22~27min,70%B; 后运行，5min
✓
流速：0.4ml/min
✓
柱温：30 °C
✓
检测波长：250 nm(4nm), Ref: 400 ±50 nm; 采样频率：40Hz
✓
进样量：1 μL
替代方法：
✓
色谱柱：ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18, 2.1x100mm, 1.8μm；
✓
柱温：40℃
✓
其余同上。
加速方法：
✓
色谱柱：ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18, 2.1x100mm, 1.8μm；
✓
梯度：0~6.7min，94%-91%B；6.7-9.5min，91%B-89%B；9.5-14.9min,89-70%B；14.9-18.3min，70%B; 后运行，3 min
✓
流速：0.6ml/min
✓
柱温：40℃
✓
其余同上。
系统适用性测试：
表 1. 替代色谱柱后方法的系统适用性测试结果
表 2. 加速方法的系统适用性测试结果
结果
1）采用 ZORBAX Eclipse Plus C18 柱，特征图谱中各个特征峰的相对保留时间*在标准规定范围内，可以替代原标准中推荐色谱柱；
2）对比原标准方法和色谱图，特征峰 8 明显为叠加峰，采用替代色谱柱和方法能够较好将特征峰 8 分离成 2 个峰，两个特征峰 UV 光谱相似，但不*相同，显然通过替代色谱方法能更有效控制葛根配方颗粒产品质量；
3） 特征图谱方法即含量测定方法，采用替代色谱柱方法和加速方法时，目标峰的理论板数高于标准 10 倍以上，*满足要求；
4） 加速方法分析时间缩短约 9 分钟，且各特征峰的分离良好，相对保留时间仍在规定范围内。
实验结论
本实验选用 ZORBAX Eclipse Plus C18 色谱柱对葛根配方颗粒特征谱图及含量进行了检测，均符合标准要求。原方法流速较低（0.4 ml/min），分析时间较长。通过提升流速，分析时间减少约 9 分钟，且相对保留时间、系统适应性试验结果*满足要求。
仪器系统及色谱柱推荐
1290 Infinity II 四元 UHPLC 系统：全能泵(G7104A)，自动进样器（G7129B），柱温箱(G7116B)，DAD(G7117A)
其它详细操作可以参考 Agilent 配方颗粒图谱集，或联系 Agilent。
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