石蜡切片淀粉样蛋白硫磺素荧光染色试剂盒说明书

HL80162.1 v.A

石蜡切片淀粉样蛋白（AMYLOID）硫磺素S（thioflavine S）荧光染色试剂盒

产品说明书

主要用途

石蜡切片淀粉样蛋白（AMYLOID）硫磺素S（thioflavine S）荧光染色试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和硫磺素S染色技术，与淀粉样蛋白结合，来分析存档中的石蜡包埋的组织切片中苹果绿荧光现象的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋组织切片的淀粉样蛋白检测。广泛用于淀粉样蛋白样疾病的病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。

技术背景

淀粉样蛋白（AMYLOID）是一种同质性、嗜伊红性（eosinophilic）、不溶性的纤维蛋白（fibrous protein）聚合体，具有共同的β交叉折叠层（β sheet）组织结构特征，沉积在细胞外。蛋白质错误折叠（misfolding），且异常自我聚集将导致淀粉样变性（amyloidosis），细胞毒纤维沉积，产生组织损伤，进而引起23种不同淀粉样蛋白综合症，超过400种疾病，包括阿茨汉姆症、巴金森氏症、II型糖尿病、白内障、朊病毒疾病等。淀粉样蛋白斑（amyloid plaque）和神经纤维缠结（neurofibrillary tangles；NFT）是淀粉样蛋白综合征的病理性特征。硫磺素S（thioflavine S），苯并噻唑（benzothiazole）衍生物，含有至少6种成分，通过脱氢硫甲苯胺（dehydrothiotoluidine）与磺酸（sulfonic acid）的甲基化而成，是的淀粉样蛋白荧光探针。一旦与淀粉样蛋白纤维结合，在荧光显微镜下（激发波长470nm，散发波长510nm），呈现苹果绿荧光。

产品内容

脱蜡液（Reagent A）                XX毫升

补水液A（Reagent B）          XX毫升

补水液B（Reagent C）          XX毫升

补水液C（Reagent D）          XX毫升

清理液（Reagent E）           XX毫升

氧化液（Reagent F）           XX毫升

去干扰液（Reagent G）          XX毫升

染色液（Reagent H）           XX毫升

强化液（Reagent I）           XX毫升

稳定液（Reagent J）           XX毫升

产品说明书                1份

保存方式

保存染色液（Reagent H）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent H），避免光照；有效保证3月

用户自备

小型染色缸：用于石蜡切片的脱蜡操作

（共聚焦）荧光显微镜：用于组织细胞染色后观察分析

实验步骤

一、 脱蜡处理

1． 取出10片待测的石蜡包埋的组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）

2． （选择操作）放进80℃烘箱，孵育30分钟

3． （选择操作）室温下静置15分钟

4． 按下表依次放进小染色缸里孵育

5． 小心移去切片上的补水液C（Reagent D）

6． 小心加上XX微升清理液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面

7． 室温下孵育5分钟

8． 小心移去切片上的清理液（Reagent E）

二、样本染色处理

1． 小心加上XX微升氧化液（Reagent F），铺满整个切片样品表面

2． 室温下孵育5分钟 

3． 小心移去切片上的氧化液（Reagent F）

4． 小心加上XX微升清理液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面

5． 室温下孵育1分钟

6． 小心移去切片上的清理液（Reagent E）

7． 小心加上XX微升去干扰液（Reagent G），铺满整个切片样品表面

8． 室温下孵育5分钟 

9． 小心移去切片上的去干扰液（Reagent G）

10． 小心加上XX微升清理液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面

11． 室温下孵育1分钟

12． 小心移去切片上的清理液（Reagent E）

13． 小心加上XX微升染色液（Reagent H），铺满整个切片样品表面

14． 室温下孵育8分钟，避免光照

15． 小心移去切片上的染色液（Reagent H）

16． 小心加上XX微升强化液（Reagent I），铺满整个切片样品表面

17． 室温下孵育1分钟 

18． 小心移去切片上的强化液（Reagent I）

19． 重复实验步骤16至18一次

20． 小心加上XX微升清理液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面

21． 室温下孵育1分钟

22． 小心移去切片上的清理液（Reagent E）

23． 重复实验步骤20至22二次

24． 小心加上XX微升稳定液（Reagent J），铺满整个切片样品表面

25． 在4℃冰箱里孵育30分钟 

26． 小心移去切片上的稳定液（Reagent J）

27． 小心加上XX微升清理液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面

28． 室温下孵育1分钟

29． 小心移去切片上的清理液（Reagent E）

30． 封片

31． 即刻在（共聚焦）荧光显微镜下（激发波长470nm，散发波长510nm）观察：

淀粉样蛋白：呈现苹果绿荧光

注意事项

1． 本产品为50次操作

2． 操作时，须带手套

3． 本产品友好使用于双重染色或重叠染色，即首*行常规免疫荧光染色，然后进行硫磺素S染色

4． 石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，否则造成样品支离破碎

5． 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面

6． 组织细胞染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察 

7． 用户可以使用DAPI滤波器波长进行观察

8． 本公司提供系列淀粉样蛋白染色试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

哈灵生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。