⼿性分析很关键的⼀项是流动相的选择，⼿性分析⼀般都采⽤正相，使⽤最多的流动相是正⼰烷、正庚烷、⼄醇和异丙醇这四种，其中起洗脱作⽤的流动相是⼄醇和异丙醇，正⼰烷和正庚烷⽤来调节流动相的洗脱强度。正⼰烷和正庚烷对于样品分离没有什么太⼤的影响，不会改变选择性和分离度，通常都可以混⽤，不过正庚烷⽐正⼰烷对⼈体的伤害要⼩很多，但价格是后者的⼀倍，所以欧美的很多⼤制药公司多使⽤正庚烷，⽽国内多使⽤正⼰烷。

⼄醇和异丙醇对样品的分离起关键的作⽤，不同的醇有不同的选择性，改变醇的种类可以改变选择性，常⽤的醇类是⼄醇和异丙醇，甲醇不能使⽤是因为它和正⼰烷、正庚烷不互溶，叔丁醇粘度太⼤，⼀般作为添加剂配合⼄醇或者异丙醇少量使⽤，提供特殊的选择性，通常能起到意想不到的效果。

流动相⾥经常需要添加酸或者是碱来调节峰形，常⽤的酸有三氟⼄酸、⼄酸和甲基磺酸，碱⼀般是⼆⼄胺和三⼄胺，也有⽤⼄醇胺和异丁胺的，流动相⾥添加酸和碱的浓度⼀般要求控制在0.2%（体积⽐）以下，使⽤的原则⼀般是酸性样品加酸，碱性样品加碱，但实际上很多样品是即含酸性基团⼜含碱性基团，这就要看哪个基团作⽤强了，对于某些含氨基的两性样品，例如苯⽢氨酸，甲基磺酸是⼀个⾮常好的选择，磺酸基能够抑制氨基的碱性，⼜能提供⼀个酸性的流动相环境，使样品既能得到很好的分离⼜能获得对称的峰形。

⼀般做纯度分析检测杂质含量时我们要求尽量的采⽤低波长来让尽可能多的杂质有紫外吸收，⽽做⼿性分析时我们需要采⽤尽可能⾼的波长来去除在低波长下才有吸收的杂质的⼲扰，⼀般原则还是尽量选择样品紫外吸收zui 好的地⽅来获得较⾼的灵敏度，但流动相⾥添加⼆⼄胺会导致在低波长下基线波动变⼤，系统难以平衡，这种情况下⼀般要提⾼检测波长，实际操作过程中有些样品在⾼波长下吸收⾮常差，只能⽤低波长检测，这样的样品可以尝试在样品稀释的时候加⼊过量的⼆⼄胺（但不宜太多），⽽流动相⽤中性，从⽽获得满意的分析结果。

有些样品只添加碱或者酸效果不好，可以尝试在样品⾥同时添加酸或者碱，这样的样品我曾经遇到过，只添加酸或碱样品都拖尾，不能达到基线分离，这种情况下通过酸碱同时加⼊，最后获得了⾮常漂亮的峰形和良好的分离度。实际操作中有些样品碱性太强，进样以后根本不成峰，低波长下细看似乎能感觉到基线⼀直在漂，开始时怀疑样品浓度不够，加⼤样品浓度以后仍看不到样品峰，流动相加⼊⼆⼄胺或三⼄胺以后再进样，流动相⾥添加酸或者碱以后，基本上不会提供额外的选择性，但是却能提⾼分离度。