呕吐毒素亲和柱的原理和使用注意事项
原理
样品经提取液提取、过滤、稀释,然后通过键合有呕吐毒素特殊抗体的免疫亲和柱。此时,呕吐毒素被亲和柱中的抗体特异性的吸附,用水或缓冲液将免疫亲和柱IAC-SEP上的杂质除去,然后用甲醇使抗体变性,从而将呕吐毒素从亲和柱上洗脱下来。最后,用HPLC或荧光计进行定量检测
注意事项
使用前,免疫亲和柱需回至室温(22~25℃)。
样品添加回收试验时,标准品添加到样品中,静置2小时后或过夜,再进行样品前处理,否则会出现回收率偏低的现象。
3) 操作步骤中,样品过柱,淋洗,洗脱时,一定要控制好流速,不能太快,否则会使检测结果偏低。
4) 如果将标准品直接过柱验证回收率时,一定要确保标准上柱液中甲醇浓度不要超过5%,否则会影响柱子的吸附能力。
5) 试验中使用的玻璃仪器等,一定要清洗干净,尤其是用次氯酸等处理过的仪器,否则会使检测结果偏低。
6) 当用氮气浓缩洗脱液时,氮气流不要太大,否则会损失部分呕吐毒素。
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