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在常温下由化学反应产生的光，产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导至的发光现象。化学发光是一个多步骤的过程。
学发光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)诞生于1977年，是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析，将高灵敏的化学发光技术与高特异性的免疫反应结合起来建立的微量测定技术，因此该技术灵敏度高、线性范围宽、应用范围广。而且CLIA与放射免疫分析(RIA)、荧光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(EIA)相比，操作简便、反应快速、无放射污染，仪器简单稳定且可以实现自动化。
化学发光免疫分析包含免疫分析系统和化学发光分析系统。
免疫分析系统是指：抗原抗体标记化学发光物质或酶，经过抗原与抗体反应形成抗原-抗体免疫复合物。
化学发光分析系统是指在免疫反应结束后，利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，这种激发态中间体回到稳定的基态时，同时发射出光子，利用发光信号测量仪进行检测。根据化学发光标记物与发光强度的关系，可利用标准曲线计算出被测物的含量。
ECL化学发光法是目前常用、灵敏的WesternBlot检测方法。由于这些底物不会在膜表面沉淀、牢牢结合在膜上，因此可以通过一抗二抗去除液(Strippingbuffer)将亲和结合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足够强烈而有效解离结合的抗体，也要足够温和使转移的目标蛋白仍能完整地留在NC膜或PVDF膜上。通过使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一次SDS-PAGE胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。
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