摘要本文介绍了包含 300 多种农药的触发式 MRM 数据库和谱库的开发，并应用于采用 120 种特定农药残留开发的 LC/MS 方法分析多种食品。我们使用了 Agilent 1290 Infinity LC 和6460 三重四极杆 LC/MS 联用系统，并在采用安捷伦喷射流技术的正离子电喷雾模式下运行。采用触发式 MRM 采集模式进行定量和确认，以消除潜在的假阳性检测结果。针对 3 类商品的 5 个代表性基质进行简单的室内验证，证明了开发的触发式 MRM 方法满足定量限 (LOQ)、线性和重现性等方面的要求，适用于食品提取物中农药的分析。一些实例表明，干扰基质峰被错认为是农药的高风险可以通过触发式 MRM 消除。定量结果同时显示的自动化参考谱库匹配可以高效地审查数据并对可疑数据进行自动标记。

前言食品，作为人类的一大消费品，需要进行农药残留的分析。欧盟委员会法规 (EC) 396/2005 及其在 2008 年 9 月生效的附录中对欧盟生产或进口到欧盟的食品和饲料产品的 170000 多种不同基质中的多种农药规定了最大残留* (MRL) [1]。SANCO/12495/2011 指南 [2] 中规定了食品和饲料中农药残留分析方法验证和质量控制步骤的准则。使用多残留 LC/MS 分析方法监测和定量数量与日俱增的农药。基于它们出色的选择性和灵敏度，分析者普遍认为三重四极杆质谱仪是定量多种食品中数百种低浓度农药的*佳仪器。然而，对于复杂基质，一些案例已发现因基质成分的保留时间与农药相近或相同而干扰农药的 MRM 谱图，从而造成假阳性的结果 [3]。某些时候，SANCO/12495/2011 规定的鉴定标准要求要有 2 个具有恒定离子比的 MRM transition，而保留时间并没有足够的选择性来进行对于明确的鉴定。因此，我们需要采集更多的 transition 或化合物的全谱。通常，这会影响方法可以涵盖的化合物数量。触发式 MRM 可以使二者同时实现，快速的循环时间实现几百种化合物的分析方法和全谱采集。根据一个或更多主要 transition的响应，可以最多被“触发”9 个附加 transition，从而获得与谱库进行比对的化合物全谱。所以，化合物的确认不仅依据两个主要 MRM transition 峰面积的比值，而且依据与参考谱库的匹配得分。因为每个碎片都是在*优化的碰撞能量下生成的，还因为在触发式 MRM 下每个碎片的驻留时间明显长于全扫描下的驻留时间，因此，触发式 MRM 的谱图质量要显著优于数据依赖的子离子扫描 [4]。此外，触发式 MRM 通过安捷伦动态 MRM 算法进行管理，确保了主要（定量）transition 循环时间的一致性。因此，触发式 MRM 谱图的采集不会影响数据采集速率和定量色谱峰的峰面积。

本文根据针对农药残留分析的欧盟参考实验室 (EURL)“Checkyour-Scope”目录，展示了包含适用于 LC/MS 分析的 300 多种最重要农药的触发式 MRM 数据库和谱库的开发过程，并将该触发式MRM 采集模式应用到不同食品（柠檬、西红柿、绿茶和生姜）中 120 种农药残留的分析中。对选定基质的 QuEChERS 萃取液进行加标，浓度范围从 1 µg/kg 到 100 µg/kg。以西红柿、柠檬和绿茶 3 种食品为代表，根据 SANCO/12495/2011 进行了室内验证。同时对触发式 MRM 方法以及相应的动态 MRM 方法的性能进行了鉴定，包括根据信号的抑制或增强 (SSE) 对基质效应进行的评估、线性测定、根据信噪比测定定量限 (LOQ)，以及通过不同加标浓度的 5 个平行样测定计算的重现性等。一些复杂基质的实例表明，在一个或者两个主要 MRM 谱图上有干扰，但触发式 MRM 提供的更多有价值的信息可以避免假阳性结果的出现。

实验试剂与化学品所有试剂和溶剂均为 HPLC 或 LCMS 级。乙腈和甲醇购于 Baker公司（Mallinckrodt Baker，Deventer，荷兰）；超纯水用配有0.22 µm 滤膜过滤终端的 Milli-Q 集成系统制备（EMD Millipore，Billerica，MA，美国）；甲酸购自 Fluka 公司（Fluka AG，Buchs，瑞士）；甲酸铵溶液 (5M) 来自安捷伦公司（部件号 G1946-85021）；绝大多数农药分析标准品购自 Dr. Ehrenstorfer 公司（Augsburg，德国）。溶液与标准液根据其理化性质的相似性，将单个农药标准溶液混合，用乙腈配成8 个混标，每个分别含有 30 到 40 种化合物，浓度均为 10 µg/mL，–20 °C 下保存。临用前，将 8 个混标进一步混合，用乙腈配成浓度为 1 µg/mL，含有 300 多种化合物的农药混标溶液。该溶液用于向 QuEChERS 萃取液中加标和制备校准样品。用纯乙腈制备范围从 0.1 到 100 ng/mL 共 8 个浓度的校准样品。样品前处理水果和蔬菜、干燥的菊花茶和绿茶均购于当地的蔬菜水果店。根据法定的柠檬酸盐缓冲液的 QuEChERS 方法 [5]，采用安捷伦BondElut QuEChERS 试剂盒（部件号 5982-5650）进行样品前处理。称取 10 g 均浆的水果和蔬菜，或者 2 g 菊花茶或绿茶，置于50 mL 塑料试管中。用 10 mL 超纯水将菊花茶或绿茶浸湿。所有样品均使用 10 mL 乙腈用力振荡萃取 1 min。只有柠檬的匀浆液后来又加入 600 µL 5 M 的氢氧化钠溶液进行中和。将含有 4 g 无水 MgSO4、1 g NaCl 和 1.5 g 缓冲柠檬酸盐的萃取盐包加入每个试管中使分层，将试管再振摇 1 min，并在 3000 rpm 的速度下离心 5 min。将 6 mL 上层乙腈液转移至安捷伦 BondElut QuEChERS EN 分散型 SPE 萃取管中（部件号 5982-5256），该萃取管中含有用于净化的 150 mg N- 丙基乙二胺 - (PSA) 和 15 mg 石墨化碳黑 (GCB)，以及用于去除水分的 900 mg MgSO4。将萃取管封闭，涡旋1 min。然后在 3000 rpm 的速度下离心 5 min。将澄清的萃取液转移至玻璃样品瓶中，向每毫升萃取液中加入 10 µL 5% 的甲酸乙腈溶液，以提高目标农药的稳定性。为了评估重复性和基质效应，提取了空白西红柿、生姜、柠檬、绿茶和菊花茶的样品，并且通过向样品的 QuEChERS 空白萃取液中加入适量的最终农药混标溶液，配制成 3 个浓度的基质匹配标准品。基质匹配的标准品配制完成后要立即进样分析，并平行测定 5 次。

仪器设备样品分离使用 Agilent 1290 Infinity UHPLC 系统，包括 Agilent1290 Infinity 二元泵 (G4220A)、Agilent 1290 Infinity 高性能自动进样器 (G4226A)，以及 Agilent 1290 Infinity 柱温箱 (G1316C)。UHPLC 系统与配备了安捷伦喷射流电喷雾离子源的 AgilentG6460A 三重四极杆质谱联用。使用 MassHunter 工作站软件进行数据采集和分析。

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结论食品中农药的假阳性鉴定是质控实验室关注的重点问题。在基质 - 农药组合存在的情况下，如果只采集 2 个 MRMtransition，就会出现假阳性的结果。在本文中，我们将触发式 MRM 与谱库参考谱图检索相结合，有效地消除了潜在的假阳性结果。因为每个 MRM transition 都使用了优化的碰撞能量和合理的驻留时间，即使在非常低的浓度下和复杂的基质中，触发式 MRM 仍可以生成可靠的化合物谱图。良好的线性校准曲线和重复测定优异的精密度表明，在触发了附加 transition 进行定性的情况下，定量结果未受到丝毫影响。触发式 MRM 只需通过一次分析运行，即可实现对大量农药准确的定性和定量。仅通过使用一个主要 transition，触发式 MRM 能将多残留方法分析化合物的范围扩大为目前以定量和定性 transition 为鉴定依据方法的 2 倍。该开发的数据库和谱库作为安捷伦触发式 MRM 谱库和数据库的一部分可供使用。其中包括了 600 多种农药的 transition、分析条件和谱图，安捷伦产品部件号为 G1733CA，或者部件号G1733BA 产品，其中还包括了色谱柱、综合农药混合标准品和相关的应用支持