使用免疫亲和柱需要注意哪些地方？

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来源：广州太玮生物科技有限公司 2022年06月29日 18:27

免疫亲和柱是利用抗原抗体特异性可逆结合特性的SPE技术，根据抗原抗体的高选择性，从复杂的待测样品中提取目标化合物。

免疫亲和层析常见的用途是纯化重组蛋白。免疫亲和层析是从粗混合物中纯化蛋白质或核酸理想选择。如果蛋白质的分子量，疏水性，电荷等未知，亲和色谱法仍可适用于这种情况。一个典型例子是尝试分离具有特定活性的酶时，可以用与所选底物相似或相同的连接配体构建亲和柱。

免疫亲和柱的使用要点：

1、上柱的样品溶液应该保持酸碱中性、无悬浮物、甲醇浓度不宜过高；

2、若样品为复杂样品，例如高蛋白、高油脂、酸性样品，可以将提取液分两次提取样品，可以提高提取效果；

3、样品过柱及甲醇洗脱速度要慢且均匀，约每秒1-2滴；

4、抗原抗体发生反应的最佳温度是在25℃左右，实验需要的环境温度最好是室温24℃-28℃，太高或太低的温度都会对回收率有一定的影响。在使用前需要恢复至室温再进行实验；

5、不要在无水状态下，琼脂容易干燥萎缩，影响质量；

6、储存条件为4℃-8℃。切记0℃以下的低温，因为缓冲液冻结，会严重影响亲和柱内的物理结构，对质量影响很大；

7、洗脱一般选择试剂甲醇，为增强洗脱效果可加大甲醇体积；

8、样液免疫净化后，洗脱液过0.45um或更小孔径滤膜效果更好。

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