酸奶中有机酸检测的固相萃取方法

酸奶中有机酸的介绍：

酸奶是以牛奶为原料，经发酵之后的一种牛奶制品。有机酸是酸乳中的重要因素，具有抑菌、抗病毒等作用。有机酸不仅是酸乳发酵的重要指标，也是酸乳的主要风味和营养物质之一和天然防腐剂，其含量高低于酸乳的品质有密切关系。

《GB 5009.157-2016食品中有机酸的测定》规定了食品中酒石酸、乳酸、柠檬酸等七种有机酸的检测方法。有机酸是目前食品领域内采用的比较普遍的酸味剂，可以提高食品的风味，食品中一部分的有机酸是食品中固有的或者是工艺中形成的，但是仍然有一部分有机酸是人为添加的，因此检测食品中的有机酸的含量是很有必要的。

中检维康生物根据《GB5009.157-2016食品中有机酸的测定》，利用Clover® SAX固相萃取柱作为酸奶中有机酸检测的样品前处理方法，HPLC法为检测手段，开发出酸奶中有机酸的测试方法。

实验耗材：

Clover® SAX固相萃取柱1000mg/6mL(货号：SAX10006)

样品前处理：

准确移取酸奶5.0 g于50 mL离心管中加入水至50 mL涡旋1 min分散均匀。4500 r / min离心10 min。取上清液5 mL，备用。

SPE柱净化：

1.活化： Clover® SAX固相萃取柱使用前用6 mL甲醇、6 mL 水活化；

2.上样和洗脱：往固相萃取柱中加入提取备用液，弃去流出液；加入 5 mL 水淋洗，弃去淋洗液；2 mL 固相萃取柱洗脱液（6% 盐酸 - 水溶液）洗脱，收集洗脱液。（整个上样淋洗洗脱过程中流速保持 <1 mL/min）

3. 重新定容： 洗 脱 液 定 容 至 2 mL，0.22 µm 滤 膜 过 滤，供HPLC上样测试。

HPLC条件：

· 设备：Waters Alliance 2695

· 色谱柱 ：Clover® C18色谱柱 (4.6×250mm)

· 检测器 ：Waters 2487 紫外检测器

· 流动相： A：甲醇   B：0.025 mol/L磷酸二氢钾（PH：2.5）

· 等度洗脱 ： A： B=5：95

· 流速：1.0 mL/min

· 检测波长：214 nm

· 进样体积:20 μL

实验结果：

0.2mg/Kg 酸奶中有机酸的添加回收结果

实验结论：

采用Clover® SAX固相萃取柱可以有效的用于酸奶中的有机酸含量的测定，酒石酸和柠檬酸检测的回收率在85-95%左右，符合国标的标准要求。同时，Clover® SAX固相萃取柱仍然可以用来作为食品中的其他固体、液体等基质中的有机酸的测定。

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