大量DNA产物纯化试剂盒操作步骤

版本号：08152012

MaxiDNA Purification Kit

大量 DNA 产物纯化试剂盒

目录号：  K0517

保   存：  室温

组分说明

Cat.No.                                 K0517

KitSize                                   50

BufferPB                               60ml

BufferPS                                  15ml

BufferPW（concentrate）         10ml

BufferEB                                  10ml

SpinColumnDL                       50

CollectionTube（2ml）           50

产品简介

      本试剂盒采用新型硅基质膜技术，通过快速简单的结合-洗涤-洗脱步骤即可从大量的 PCR 产物或酶反应液（酶切，连接，探针标记等）中纯化 50 bp-50 kb 的 DNA 片段，纯化过程中可有效去除引物、寡核苷酸、酶等杂质，从而获得高纯度，高浓度，完整性好的 DNA 片段，回收率高达 90%。本试剂盒回收纯化的 DNA 可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。

注意事项

1.本试剂盒可无选择性的回收溶液中所有 DNA 片段，如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择我公司的胶回收试剂盒（K0524, 加 K2302，K0518 或 K0526）。

2.第--次使用前应按照试剂瓶标签的说明在BufferPW中加入无水乙醇。

3.使用前请检查BufferPB是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。

4． 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关。

5． 所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

自备：无水乙醇，离心管

操作步骤

1.估计DNA反应液的体积，加入5倍体积的Buffer PB，充分混匀（如DNA反应体系为100µl，则加入500µlBufferPB，无需去除石蜡油或矿物油）。

注意：在加入BufferPB后检测溶液的pH值，若pH值大于7.5，可向其中加入10-30 μl 的3M醋酸钠（pH5.0），从而将pH值调到5-7。

2.柱平衡：向已装入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDL）中加入200  μl Buffer PS，12,000rpm（~13,400×g）离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

3.将步骤1中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

注意：吸附柱容积为700µl，若样品体积大于700µl可分批加入 。

4. 向吸附柱中加入650 µl Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，

5. 将吸附柱放回收集管中。

6.注意：如果纯化的DNA用于盐敏感实验（例如平末端连接实验或直接测序），建议加入BufferPW后静置2-5分钟再离心。12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以*晾干。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以*晾干吸附材料中残余的乙醇。

7. 将吸附柱放到一个新离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加100 µl Buffer EB（pH 8.5），室温放置2分钟。

8. 12,000rpm离心1分钟，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

注意：1）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5之间（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。

2）为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中，重复步骤6。

3）洗脱体积不应小于50μl，体积过少会影响回收率。

4）如果使用TE洗脱，需要考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促应。

5）回收大于10kb的DNA片段时，BufferEB应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。

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