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细胞计数仪的用途以及细胞培养需要注意的外在因素

来源:上海拓开生物科技有限公司   2022年06月07日 13:26  
 一:用途:

细胞计数是细胞培养研究中的一项基本研究,它是了解培养细胞生长状态,测定培养基、血清和药物等物质生物作用的重要手段。自动细胞计数器能够在1min以内对培养的细胞分析,并获得细胞活细胞和死细胞浓度、细胞平均体积大小、生存能力、细胞大小或体积分布曲线图。自动细胞计数器还有用于藻类,微生物等直径细胞计数器范围内的生物。相对血球计数板法,细胞计数仪计数更加精确,快速便捷,误差更小。

二:仪器在实验中的应用:

测定不同时间段的培养液中细胞的浓度,绘制细胞的生长曲线,确定细胞的倍增时间。这是细胞培养过程中必要的一项研究。细胞的生长包括滞留期,指数生长期(对数期),平台期(生长停止期)如下图。不同的生长时期细胞内的代谢途径是不同的。
 

 细胞生长曲线示意图

三:细胞计数。在测定胞内外代谢物的时,可以知道每个细胞的胞内外代谢物的情况,避免了在平行实验或者是对照实验中由于细胞数量不同而造成的误差。

四:细胞存活率。细胞的存活率可以用于细胞毒性实验,药物处理实验,细胞凋亡实验等实验中。

五:获得细胞体积直方图可以得到用来区别细胞的形态。

那么细胞培养时防止收到外界影响需要注意什么?

1.无菌环境

无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内,解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵,但细胞在体外培养的过程中,缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。为保证细胞能在体外环境中生长繁殖,必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。

2.合适的温度

一般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37~38℃,不适宜的环境温度会影响细胞的生长。细胞对低温的耐受能力要强于对高温的耐受能力,在低温下,细胞的代谢活力及核分裂能力降低。若温度不低于0℃,虽然细胞代谢受到影响,但无损伤作用;25~35℃时,细胞以缓慢的速度生长;但若被置于40℃数小时,则不仅不利于细胞生存、生长,甚至可导致其死亡。

3.适宜的渗透压

高渗溶液或低渗溶液会引起细胞发生褶皱、肿胀、破裂。因此,渗透压是体外培养细胞的重要条件之一。多数体外培养的细胞对渗透压都有一定的耐受能力,实际应用中,260~320mmol/L的渗透压可适用于大多数细胞。

4.气体环境与pH

细胞的体外培养需要理想的气体环境,氧气、二氧化碳是细胞生存的必要条件。氧气参与细胞的三羧酸循环,为细胞生存、代谢与合成提供能量;二氧化碳既是细胞的代谢产物,是细胞生长的必需成分,又与维持培养液的pH有关。大多数细胞适宜的pH范围往往是7.2~7.4。在开放式培养中,以5%的二氧化碳气体比例为宜。


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