定量PCR仪的分析方法及技术概述

来源：北京海洋蓝天科技发展有限公司 2022年05月12日 15:39

实时荧光定量PCR仪技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

1.Ct值的定义

在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念--Ct值。C代表Cycle，t代表threshold（阈值，临界值），Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。

2.荧光阈值的设定

PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光阈值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，即：threshold=10′SDcycle3-15

3.Ct值与起始模板的关系

研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。

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