化学染色法

染色计数法是细胞培养中检查细胞死活zui常用的方法,直接利用死细胞和活细胞对染料的不同亲和力,检查细胞活性,能在光学显微镜下观察到染色结果.可分为两类:死细胞着色法和活细胞着色法.使死细胞着色的常用染料有台盼蓝,苯胺黑,伊红Y.能使活细胞着色的常用染料有结晶紫,亚甲基蓝,甲苯胺蓝等.其中zui常用的是台盼蓝染色法….细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA结合,使其着色,而活细胞能阻止染料进入细胞内,故可以鉴别死细胞与活细胞.通过细胞计数可得出细胞的存活率.

优点：方便实用，价格低廉，操作简单

缺点：时间不宜过长,否则部分活细胞也会着色,会干扰计数.而且,细胞没有经过固定,形态不清晰.

荧光染色法

一些荧光染料对死细胞和活细胞也有不同的作用效果,利用荧光显微镜检测细胞活性.如碘化丙锭。(PI),被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡细胞的细胞膜,因此活细胞不被染料染上色,只有死细胞或是凋亡细胞才能染上红.色.叶啶橙(AO)能透过质膜完整的细胞,嵌入细胞核DNA,使之发出明亮的绿色荧光.溴化乙锭(EB)仅能透过胞膜受损的细胞,嵌入核DNA,发橘红色荧光.也可应用AO—EB双染法鉴定细胞死活.

优点：这种检测方法相比传统的染料,具有灵敏度高,操作简便,结果容易分辨等特点,而且利用双染法还可以分辨活细胞,凋亡早期细胞,凋亡晚期细胞,死亡细胞，在细胞凋亡的检测上有很广泛的应用。

缺点：要求特殊的仪器进行检测,如荧光显微镜,激光扫描共聚焦显微镜或流式细胞仪.而且通常荧光染料具有毒性,操作作时需要带手套.