激光共聚焦显微镜的应用以及操作步骤介绍

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来源：上海曼戈斐光学技术有限公司 2021年12月28日 08:47

激光扫描共聚焦显微镜是采用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置，并利用计算机对所观察的对象进行数字图象处理的一套观察、分析和输出系统。主要包括激光光源、自动显微镜、扫描模块（包括共聚焦光路通道和针孔、扫描镜、检测器）、数字信号处理器、计算机以及图象输出设备等。

主要用于组织切片、活细胞的荧光标记、三维图像重建分析研究；细胞生物物质、离子的定性、定量、定时和定位分布检测等；多重荧光观察；长时间活细胞观察；对材料进行反射光直接观察和共聚焦成像扫描，可对显微图像进行普通荧光和DIC成像记录和分析。

激光共聚焦显微镜操作步骤：

1.根据荧光探针的激发和发射波长选择合适的激光，激光功率，光谱滤光片和发射滤光片。

2.确定扫描方法：点，线，面，3D扫描。

3.确定扫描密度（分辨率）：256×256,512×512,1024×1024,2048×2048，分辨率越高，扫描速度越慢，图像信噪比越好，但越多可能会发生光漂白。

4.选择共焦显微镜物镜的倍数和电子放大倍率：确定此条件后，确定扫描范围，物镜的透光率与数值孔径（NA）的四次方成正比，并且物镜放大倍数的平方。因此，反比例，应尽可能选择具有高数值孔径的物镜。

5.根据样品的制备质量，选择合适的针孔尺寸，调节激光管电压，光电倍增管功率，降噪等，达到最佳状态。这些参数的选择或设置非常紧密，应该全面考虑。

6.确定光线切割范围，即扫描样品的厚度，起始位置和结束位置。

7.给出了由光切割的层数和拍摄时的累积平均次数。

8.获取图像并保存。

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