手机版
化工仪器网手机版
化工仪器网小程序
官方微信
公众号：chem17
扫码关注视频号
高通量测序（Next Generation Sequencing，NGS）近年来飞速发展，在各个领域已被广泛应用。而文库的制备是NGS技术中极为重要的步骤。所谓文库制备（Library Preparation）就是在DNA的片段两端连接上特定序列的接头的过程，让文库可以在高通量测序平台上进行测序。
文库构建的最终目的在于成功测序，并获得序列信息。那么如何判定这个文库能否上机测序呢？想必这是大家一致关注的问题。
文库的数量和质量是能否成功测序的关键。文库的浓度和文库分布是评价文库质量的两个关键参数。
文库构建完成后，我们首*行文库浓度的测定。核酸定量的方式有多种，但基于紫外分光光度的测定方法相对不够精准定量，比如Nanodrop或酶标仪，我们推荐使用染料法进行核酸定量，在文库构建中比较常用的核酸定量仪器是Thermo Life Qubit 3.0荧光定量仪。
如果文库浓度符合上机需求，接下来我们用Agilent 2100生物分析仪来检测其片段大小是否符合预期，其峰值大小应该是目的片段加上接头序列的总长度。
除ATAC、cfDNA和small RNA等特殊文库外，一般情况下，好的文库应该呈现出单一的、圆滑的峰且接近正态分布，并且文库中小于280 bp和大于1000 bp的片段占比不要过大（如大于20%）都可上机测序。
图1：常规文库2100峰型图
图2：cfDNA文库2100峰型图
图3：ATAC文库2100峰型图
图4：文库峰型偏大
图5：接头、引物残留峰型图
（红色箭头标注为引物残留，蓝色箭头标注为接头残留）
图9：过度扩增峰型图
相关产品
免责声明
- 凡本网注明“来源：化工仪器网”的所有作品，均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-化工仪器网合法拥有版权或有权使用的作品，未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的，应在授权范围内使用，并注明“来源：化工仪器网”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
- 本网转载并注明自其他来源（非化工仪器网）的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点和对其真实性负责，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品第一来源，并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。
采购中心
