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地衣芽孢杆菌检验操作步骤

来源:上海吉至生化科技有限公司   2021年10月22日 15:28  

固体和半固体样品

称取25g样品,置于225mL生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打lmin~2min制成1:10的样品匀液;或置于盛有225mL灭菌生理盐水的无菌均质杯中,8000r/min~10000r/min均质lmin~2min制成1:10的样品匀液。

液体样品

应先将其充分摇匀后,以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分振摇﹐制成1:10的样品匀液。

样品稀释

1mL无菌吸管或微量移液器吸取l:10样品匀液lmL,沿管壁缓慢注于装有9mL生理盐水的无菌试管中

另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头,按上述操作顺序,做10倍递增样品匀液,每递增稀释一次,即换用1次lml灭菌吸管或吸头。

培养

根据对待检样品菌含量的估计,选择2个~3个连续的适宜稀释度﹐每个稀释度水浴80℃±l℃维持10min,吸取菌液0.2 mL接种于营养琼脂平板内,使用涂布棒尽可能小心快速地涂布接种液于琼脂表面,涂布棒不得接触平皿边缘。每个稀释度接种2个平板。涂布后,将平板静置10min使接种物*被培养基吸收。翻转平皿置于37℃±1℃厌氧培养箱中培养48h±2h。

菌落计数

选取特征菌落数在20CFU~200CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于20CFU的平板记录具体菌落数,大于200CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。

当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。

菌落挑选和纯培养

挑选平板上5个白色不透明、湿润、边缘光滑的菌落分别转入营养肉汤培养基37℃±1℃厌氧培养箱中培养24h±2h后进行形态学、生化鉴定。

形态学鉴定

革兰氏染色,镜检。地衣芽孢杆菌为革兰氏阳性杆菌,呈杆状,长度1.5u.m~3.5um,单个、成对或短链状排列,有芽孢,芽孢椭圆形,中生或近中生,芽孢囊不明显膨大。

生化鉴定

使用细菌生化鉴定试剂盒进行生化鉴定。

 

 

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