① 跑到溴酚蓝距离最下缘 25px 时配电转液（tris3.03g，甘氨酸 14.4g，甲醇 100ml，定容至 1L） 

② 在电转液中剥胶，裁胶，剪膜，膜活化（甲醇 1min，去离子水 1min，电解液 15min） 

③ “三明治”黑板~海绵~三层滤纸~胶~膜（正面朝下，分清左右，与胶对应）~3 层滤纸~海绵 ~白板，夹紧后放入电转槽中。（海绵，滤纸，膜需浸润透，过程中不能干，赶赶气泡） 

④ 连接电源，一定要注意红对红，黑对黑，定电流和时间（150mA，1h，若分子量大于 90， 再加 200mA，2h）具体情况具体分析

经验总结： 

溴酚蓝跑到最终的距离是根据你所需要切的分子量决定的，假如你就只需要切一条 ACTIN(43Kda)这样的，你*只需要跑到下胶，看到差不多 marker 分开了就可以切胶了。假如你要从最上到最下切好多条出来，你则需要把溴酚蓝尽量跑到最下面，这样 marker 容易被跑开，有利于切胶。滤纸和 PVDF 膜的裁剪必须要整齐，干净，标记清晰。 PVDF 膜型号的选择要正确。如正常的 30~170kDa 的分子一般需要孔径 0.45mm 的膜就足够了。太小的则需要选择孔径为 0.22mm 的膜。关于转膜是否要加 SDS 的问题。SDS 带负电，加 SDS 一般是针对那些分子量大的 WB，加入 SDS 可以增加分子导电性，这样更利于转膜。 关于转膜电流，分子是否能够转过去和转膜时间没有必要关系，而更在于转膜电流的大小。 举个例子，200kDa 的分子量，你用 90mAh 就算转一年都转不过去。