冰冻切片氧化应激活性氧超氧阴离子MitoSOX红色荧光测定试剂盒

冰冻切片氧化应激活性氧超氧阴离子MitoSOX红色荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

  冰冻切片氧化应激活性氧超氧阴离子MitoSOX红色荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂MitoSOX，在线粒体氧化损伤条件下，产生红色荧光，来检测冰冻组织细胞线粒体内超氧阴离子活性氧族的存在状况的*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适宜于冰冻动物组织细胞线粒体内的超氧阴离子分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，定性检测，性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2^-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH^-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO^-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO^-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO^-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。其中线粒体氧化磷酸化副产物之一是超氧阴离子，为线粒体内最主要的活性氧族，与心血管疾病，包括高血压、冠状动脉硬化、糖尿病相关的血管疾病、神经退行性疾病（巴金森氏症、阿茨罕默症、肌*硬化症）相关。MitoSOX是一种*自由通过细胞膜，并选择性在活体细胞线粒体内长期滞留而不外漏的染色剂。一旦被超氧自由基阴离子氧化，便产生荧光。据此证明细胞线粒体内超氧阴离子活性氧族的存在。 

产品内容

  清理液（Reagent A）            毫升

  染色液（Reagent B）            微升

  稀释液（Reagent C）            毫升

产品说明书               1份

保存方式

保存  染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器

培养箱或恒温水槽：用于染色孵育

（共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光组织细胞

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的  染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，  稀释液（Reagent C）置于室温预热。然后移出xx微升  染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升  稀释液（Reagent C），混匀后，标记为  染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。

1． 准备5片待测的厚为10微米的未经固着处理的冰冻切片

2． 置于室温下，小心加上xx微升预冷的  清理液（Reagent A），铺满整个切片表面

3． 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）

4． 小心加上xx微升室温预热的  染色工作液，铺满整个切片表面

5． 在37℃湿润培养箱里，孵育10分钟（注意：避免液体蒸发）

6． 小心移去切片上的  染色工作液，避免光照

7． 小心加上xx微升  清理液（Reagent A），铺满整个切片表面

8． 小心移去切片上的  清理液（Reagent A）

9． 放上盖玻片或封片

10． 即刻在（共聚焦）荧光显微镜下观察（定性检测）：激发波长510nm，散发波长580nm――红色荧光增强，表明超氧阴离子含量高

注意事项

1． 本产品为20次操作

2． 建议使用新鲜组织（手术切除后1小时内）制成的冰冻切片

3． 操作时，须戴手套

4．   染色工作液避免光照

5． 孵育时，须避免光照

6． 建议组织染色完成后，即刻进行荧光定性分析

7． 本公司提供系列活性氧检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰