高效液相色谱法的应用范围十分广泛,对样品的适用性广,不受分析对象挥发性和热稳定性的限制,几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定,因而弥补了气相色谱法的不足。下面讲讲流动相和过滤器在高效液相色谱中的作用:
1、流动相
流动相就比如人体的血液,其质量直接影响到整个系统的正常运行与否。
应该使用HPLC级的溶剂,不能互相混溶的溶剂不可以直接切换!一般在水相和与其不混溶的溶剂切换时,使用异丙醇作为过渡溶剂。
注意溶剂的截止波长。截止波长是指该溶剂可以在紫外检测器中使用的低波长,低于该波长后,溶剂会有很强的紫外吸收,从而影响极限的稳定性、干扰对所分析物质的检测。
HPLC所使用的水必须是新鲜的和经过0.45μm滤膜过滤过的。建议每天更换新鲜的水。长期不用时,必须把使用水的管路用有机溶剂置换,防止长霉。
仪器使用完后要采用适当的溶剂冲洗等方法维护色谱柱和系统。如果使用了缓冲盐一定先将盐要冲洗干净。
仪器长期不用时,不建议使用纯乙腈封存。因为乙腈有生成聚合物的趋势。建议使用甲醇、甲醇/水或乙腈/水封存。
当有流路堵塞时,可以尝试将之反接后冲洗。污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将会缩短溶剂过滤器的使用寿命,并且影响泵和系统的的性能。这在水溶剂或磷酸盐缓冲液(pH4至7)中尤其如此。
2、过滤器
检查溶剂过滤器
查看过滤器是否变色(尤其是盛放水相的溶剂瓶)–拧开脱气机出口或比例阀入口管线,此时溶剂会因为重力流出。当脱气机或溶剂过滤头堵塞时,溶剂会流出不畅或不流出–临时取下过滤器,检查柱前压力是否正常。
清洁溶剂过滤器
将堵塞的溶剂过滤器从瓶头组件中拿下,用水冲洗残留之溶剂,然后将过滤器放在装有浓硝酸(35%左右)的烧杯里浸一小时。用二次蒸馏水*冲洗过滤器至水为中性可以把过滤器放在塑料烧杯内超声清洗。但是不可使用玻璃器皿将过滤器重新装好。
建议:定期清洗溶剂过滤器及溶剂瓶(可以高温灭菌),每三个月至少清洗一次。
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