随着医疗器械与电子技术的深度结合,使得荧光定量PCR在各个领域,包括人类身份鉴定、病原体检测、产前诊断、药物疗效考核、肿瘤基因检验都有广泛应用。各大医院、科研机构、实验室等场所都随处可见,但是,他们选购荧光定量PCR时可能会遇到这样的问题:到底选购几通道的合适呢?
先先带大家了解一下什么是所谓的通道呢?
顾名思义,通道(channel)指的是针对每一种荧光的检测器,比如你在一个管中做多个颜色,针对多个靶基因。每个颜色需要一个检测器来检测荧光信号的强弱,每一个针对不同颜色的检测器,就是一个通道。
目前市面上大部分荧光定量PCR仪在设计时已经固定了荧光通道数,因此大家在选择仪器时会比较慎重,通道数选少了担心无法满足后续新的实验应用;通道数选多了一是担心购置预算不足,二是担心某些通道可能一直闲置,用不上,造成资源浪费。
正因为每个光学卡夹都是一套独立的光路,因此您可以根据实验室的当前的购置预算以及实验应用需求选择单、双、三、四、五或六个荧光通道。如果未来有新的实验应用,也只需要添加相应的卡夹即可实现升级,实验室人员自己就可以进行安装。
除了在通道选择上的灵活性,带有卡夹式光路设计的荧光定量分析仪的好处还在于:每个卡夹都针对特定的波段进行了优化,因此针对特定的染料的检测效果。
此外,每个卡夹有8个光源和检测器,对应96孔板的一列,检测时以一列即8孔为单位进行,相较于单孔检测的方式,速度会更快。卡夹排列于卡夹盒中,检测时所有卡夹在卡夹盒中移动完成对96孔板的信号收集,完成96孔板6个通道的一次信号采集时间小于3秒,因此也可以大大缩短多重PCR的时间。
目前市面上生产荧光定量PCR 的厂家非常多,如何选择合适的荧光定量仪器也变得非常重要。面对性能不同的产品,选购商品时也变得眼花缭乱起来。这时,就有人一不下心走进了“选购误区”。
在使用有些厂家5通道的荧光定量仪时,为了确保实验结果的精确性和准确性都要在实验中使用ROX(一种荧光染料)或的Referencedye,这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。
这样以来,真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只有4个,而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。有的荧光定量PCR的检测通道是只为自已厂家的的荧光染料或试剂开放的,有效检测通道也绝非像宣传资料中宣称的那么多。在购买前确认荧光定量PCR仪器的有效检测通道尤为重要,不能单单只听宣传。
考虑多重荧光定量PCR的通道数的时候也应该从实验室实际情况出发,多重PCR并非人人适用、人人可用,因为它使实验复杂化了。
荧光定量pcr仪的使用也应征求实验科研人员的建议,毕竟真正使用器械做实验的还是他们。
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