大脑中动脉阻塞 (middle cerebral artery occlusion，MCAO) 是目前常用的局灶性脑缺血模型，MCAO模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。从ECA插入MCAO模型线栓尼龙线，经颈内动脉（ICA）到大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。 线栓法具有不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间的优点，用于研究神经元对缺血的敏感性、耐受性，药物疗效观察以及再灌注损害和治疗时间窗较为理想，同时也具有对全身影响小、动物存活时间长的特点，适于慢性脑损伤的研究。控制好易变因素，可避免实验结果的不稳定性。

1、主要器材

（1）缺血前准备：脑立体定位仪、小鼠或大鼠适配器、微量注射泵、微量注射器、颅钻

（2）缺血模型制作：气体麻醉机、异氟烷、体视显微镜、冷光源、手术台、术后保温箱、脑模具、手术器械包

（3）缺血模型评价：神经功能评价法（BBB评分）、TTC染色、病理学评价

（4）缺血后行为检测：抓力测试仪、转棒仪

2、实验动物

（1）SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为250-300g

（2）SPF级C57小鼠，健康，雄性，体重为18-25g

3、实验分组

实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

4、建模方法（以大鼠为例）

（1）1.5-2%异氟烷气体麻醉大鼠，颈部备皮，消毒，插入肛温探头，保持体温在37±0.5℃。

（2）颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉，颈内动脉和颈外动脉。使用6-0丝线在距离颈总动脉分叉4mm处结扎颈外动脉远心端，在颈外动脉穿入另一根6-0丝线，在靠近颈总动脉分叉处打一个活结。

（3）使用动脉夹夹闭颈总动脉。在距离颈总动脉分叉处3mm处的颈外动脉上剪一个小口，将一根头端处理过的0.33mm直径的尼龙线从小口中插入，进入颈内动脉，并向内插入大脑中动脉，尼龙线的插入深度距离颈总动脉分叉处约16±1mm。

（4）缺血后90min拔掉线栓，用6-0丝线结扎外动脉近心端，用3-0丝线缝合颈部伤口，活力碘消毒伤口，将大鼠放在加热垫上，待清醒后放入恒温抚养箱饲养。

（5）术后24h，对小鼠进行神经功能评分，然后继续麻醉大鼠，取大脑切片、进行TTC染色和病理染色。

5、模型的评价

（1）神经功能缺失体征评分

参考Longa及Bederson的5分制法在动物麻醉清醒后24h进行评分，分值越高,说明动物行为障碍越严重。

0分：无神经损伤症状

1分：不能*伸展对侧前爪

2分：向对侧转圈

3分：向对侧倾倒

4分：不能自发行走,意识丧失

（2）TTC染色

麻醉大鼠后，取大鼠脑组织，放入-20℃冰箱冷冻30min。用PBS配置1%TTC（W/V），37℃水浴至TTC溶解，将冻好的脑组织切片，置于10mlTTC溶液中，37℃恒温孵育10min。不时翻动脑片，使组织均匀染色。正常脑染色后呈鲜红，而梗死区呈苍白。

（3）病理学评价

取脑后用4%多聚甲醛溶液固定，蔗糖溶液脱水后经固定，蔗糖溶液脱水后经固定，蔗糖溶液脱水后经OCT包埋做冰冻切片，包埋做冰冻切片，10um，做尼氏染色，做尼氏染色可做梗死面积的评价。